【前处理分享】关于样品混匀的探讨

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2018/10/31
鹤壁农检联合队

私聊

前处理综合讨论

【前处理分享】关于样品混匀的探讨

国庆节过后，我们收到上级部门的能力验证样品，两个笋瓜样品，其中一个为空白样品，两个苹果样品，其中一个为空白样品，样品量为200g，取样时，发样人员一再交待，让混匀后再称样品，自己称取平行样。
拿来的能力验证样品均为冷冻样品，我们先化冻，放温水盆里解冻，解冻后采用在混匀器上混匀5min，在超声波里超声10min，然后称取样品25g，按照NY/T761-2008方法进行前处理。

图1：能力验证样品混匀
结果发现笋瓜样品平行性很好，苹果样品平行性不好，询问同行，认为混匀方式应该用均质器混匀，到底是样品混匀方式不对，还是前处理有问题，我做了以下试验。
一、不同的混匀方式
1、加标
1.1配制标液
标液敌敌畏、甲基对硫磷、异菌脲、氟氯氰菊酯为100ug/mL，用丙酮或正已烷配制为10ug/mL单标。
1.2加入标液
从超市买来苹果，苹果选取的是与能力验证的相近的品种，红牛苹果，破碎装进塑料盒里，每盒里准确称取200g，标注为A1、A2，然后加入敌敌畏2.8mL，甲基对硫磷2.0mL，异菌脲、氟氯氰菊酯2.0mL等。用封口膜将盖子四周粘住，不做任何混匀，直接放冰箱里冷冻。

图2：制作加标样品
2、混匀方式
2.1 混匀器+超声波超声
把加标过的A1样品放温水盆里解冻，然后在混匀器上5min，放超声波里超声25min，然后用玻璃棒充分搅匀2min，称取平行样品25.0g，按NY/T761-2008方法进行前处理。

图3：混匀器+超声波超声
2.2 匀质器混匀
把加标过的A2样品放温水盆里解冻，然后用匀质器匀浆25min，匀浆时样品粘在刀头上，用干净的玻璃棒刮进样品中，再用玻璃棒充分搅匀2min，称取平行样品25.0g，按NY/T761-2008方法进行前处理。

图4：匀质器混匀
二、测定出现的问题
1、前处理
1.1 提取出现的问题
用均质器匀浆过的样品，细度比较细，成糊状，在匀浆时粘在刀头上，不容易清洗，在静置分层时，因为含糖量高，样品不分层，需要加入纯水，重新振荡静置，分层时速度很慢，需要由原来的静置时间30min延长到1h，才能彻底分层。
用混匀器+超声波超声的样品，在静置分层时，与匀浆混匀的样品，在颜色上有明显差别，分层速度比较快，30min可以分层。

图5：要延长静置时间
1.2 净化出现的问题
A1两个样品，A2两个样品，按NY/T761-2008方法进行前处理，有机磷类分析步骤为提取与净化，净化需要氮吹近干，但在氮吹过程中有氮吹干的情况，当时没有记录哪个吹干了，直接上机测定。
有机氯类、拟除虫菊酯类分析步骤为提取与净化，净化时先氮吹近干，再过弗罗里析柱，50℃氮吹至小于5mL，再用正已烷定容至5.0mL。

图6：氮吹及氮吹后过小柱净化。
2、测定结果
敌敌畏的加标量为0.14mg/kg，甲基对硫磷的加标量为0.10mg/kg，异菌脲的加标量为0.10mg/kg，氟氯氰菊酯的加标量为0.10mg/kg。上机时用苹果基质配制浓度与加标浓度一样，用基质配的标液计算样品含量，测定结果见表1。

表1：第一次苹果中农残测定结果（mg/kg）

样品名称	敌敌畏	甲基对硫磷	异菌脲	氟氯氰菊酯
A1-1	0.10	0.079	0.084	0.085
A1-2	0.12	0.078	0.080	0.082
A2-1	0.059	0.069	0.081	0.090
A2-2	0.12	0.075	0.093	0.090

图7：混匀器+超声波超声的样品

图8：匀浆机混匀的样品
从上表与图谱可以看出，不论是混匀器+超声波超声还是匀质器混匀，都存在着平行样品不平行的现象，在前处理过程中，氮吹时有氮吹干了情况，但当时没有记录样品号，所以把加标样品拿出来重新测定。
3、重新测定
重新称取加标样品A1与A2，按上述步骤进行前处理，在氮吹时与同事说话，一不留神吹干了A1-2有机磷样品，只好重新再氮吹，结果见表2.
表2：第二次苹果中农残测定结果（mg/kg）

样品名称	敌敌畏	甲基对硫磷	异菌脲	氟氯氰菊酯
A1-1	0.14	0.086	0.088	0.089
A1-2	0.071氮吹干了	0.049氮吹干了	0.084	0.091
A1-2	0.13重做	0.080重做
A2-1	0.14	0.083	0.087	0.093
A2-2	0.14	0.088	0.090	0.096

通过表2可以看出，氮吹时对有机磷的结果影响是明显的，如果氮吹时不是近干，而完全干了，测定结果会小一半，回收率减少一半，而有机氯如果第一次氮吹干了，会有影响，但影响不会这么大，回收率也不会减少的这么多，可能与农药本身性质有关。

图9：氮吹干与近干的图谱
三、总结
从以上试验可以得出以下结论：
1、制作加标样品时，可以用高浓度标液，这样加标体积较小，不会影响到样品质量，但要充分混匀，让农药充分渗透到样品里，比如苹果样品比较粘稠，如果加了100-200uL标液，标液只会停留在样品表面某个点上，此时直接用匀浆机混匀，这个标液点就直接粘在刀头上，无法洗脱，也达不到混匀效果，会造成样品的不平行，像这种粘稠样品，有没有快速混匀的方法，希望高手们提供一些供参考。
2、样品混匀不论哪种方式，要有足够的时间，30min后应该可以混匀，称样前还需要用玻璃棒不停搅拌5min，再次混匀样品。
3、苹果样品如果用匀浆机混匀，前处理时还有匀浆的步骤，这时样品细度比较细，过滤静置时，液体比较混浊，需要加水或加氯化钠，还需要延长静置时间，才能彻底分层。
4、平行样品不平行，相差一半时，有很大可能是前处理过程出现问题，农药的性质不同，结果也不同，比如敌敌畏与甲基对硫磷的沸点不同，敌敌畏沸点74℃，甲基对硫磷的沸点158℃，氮吹时水浴温度80℃，如果氮吹完全干，甲基对硫磷的回收率有70%以上，而敌敌畏的回收率只有50%，；其它如异菌脲、氟氯氰菊酯等农残，因为沸点和分子结构不同，损失没有敌敌畏的损失大。

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