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求助C18色谱柱可能被蛋白质堵了

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2019/03/22

液相色谱（LC）

该如何挽救？液相新手，在做蛋白酶降解毒素研究，柱子是安捷伦的4.6*250mm长柱，流动相是乙腈和超纯水。
刚开始做不太懂，可能进样前对样品处理不足，现在色谱柱压力很高，1.0mL/min的流速走纯乙腈压力达到了150~160bar，走样品更是高达300bar。我怀疑是蛋白或者缓冲盐将色谱柱污染了。之后，我询问安捷伦客服，他说走纯乙腈正常的压力应该在40~50bar左右，建议我对色谱柱反冲进行清洗再生，并给我发了一套清洗流程，基本都是用一些溶剂1.0mL/min的流速对柱子进行反冲。
我现在有两点疑惑请教大家，第一，我问过别的老师，老师强调柱子不能反接，查阅资料大部分观念也是不能反接，但我向安捷伦客服再三询问，得出的答案是5um的柱子反接没有任何问题，并且我搜索了一些外文资料也推荐反接。那么5um的柱子到底能不能反接？第二，如果不能反接，该怎么洗出污染物？
十分感谢诸位！

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PAEs

第1楼2019/03/22

应助达人

帮楼主转移到相应版块

0

检测老菜鸟

第2楼2019/03/22

应助达人

你先试试正冲能充下来压力不，缓冲盐用纯水0.1先冲30min看看，然后5%甲醇水冲个一天，期间观测压力。如果实在不行再反冲，反冲是可以的，流速要尽量小。

0

检测老菜鸟

第3楼2019/03/22

应助达人

记得反冲柱子，把检测器那头卸掉，拿个大烧杯

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