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气相测发酵液中短链脂肪酸

  • Insp_494cf49a
    2021/01/06
  • 私聊

气相色谱(GC)

  • 测短链脂肪酸的过程中遇到一些问题,想请教一下大家:

    1. 我的发酵液用50%硫酸酸化后,用乙醚提取,离心后取醚层过滤上样。我先用了乙醚进样,把它作为标曲的零点,但是乙醚跑的图里有很多乱七八糟的峰。



    请问这是说明乙醚有问题?柱子有问题?还是说气相跑的图就是这样?(因为我听我同学说,她气相跑的图也乱七八糟)

    2. 我有两个标品的峰,在上图中间那个很高的峰附近出,当标品含量低的时候,就是两个分不开的峰,当标品含量高的时候,就是一个大峰,我是应该调整一下这一段的升温程序吗?让它升温慢一点?
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  • 轶辰

    第1楼2021/01/06

    应助达人

    你可以分别进乙醚,直接乙醚过柱确定是乙醚还是柱子的问题。
    标品的峰在大的杂峰附近,影响出峰,可以调整流速或者柱温及分流比来改善分离度

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  • viki

    第2楼2021/01/06

    应助达人

    首先,进一针干净的乙醚、换一个干净的柱子来排查乙醚和色谱柱因素;
    其次,考虑到样品后处理后溶液的pH,后面的乱峰有点像是样品中的酸碱度导致
    最后,浓度低的时候两个峰,浓度高变成一个峰是浓度变大了之后,峰变宽了,两个峰合为一体啦。计算下那个沸点大概在什么温度,那个温度下多保持一会儿。

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  • 安平

    第3楼2021/01/06

    应助达人

    详细说说具体分析条件为好。

    建议先运行gc的程序升温空白,如果正常,无鬼峰。

    则进样溶剂,考察溶剂空白。

    如果无鬼峰,再考察样品。


    发酵液一般化学组成非常复杂,很可能问题出在样品。

    可以考虑使用较长的色谱柱,降低程序升温初始温度,降低升温速率。
    延长程序升温时间。

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  • Insp_494cf49a

    第4楼2021/01/06

    您好!

    上面那个图就是进的纯乙醚,我们实验室只有一根柱子,专门用来做短链脂肪酸的,是DB-FFAP。

    如果后面的杂峰考虑是样品导致的,那会不会是上一个人做完实验,柱子里有残留的?

    我只用过液相,没用过气相,请问气相有类似冲柱子的操作吗?老化是冲柱子的意思吗?

    viki(Insm_df8bf4f4) 发表:首先,进一针干净的乙醚、换一个干净的柱子来排查乙醚和色谱柱因素;
    其次,考虑到样品后处理后溶液的pH,后面的乱峰有点像是样品中的酸碱度导致
    最后,浓度低的时候两个峰,浓度高变成一个峰是浓度变大了之后,峰变宽了,两个峰合为一体啦。计算下那个沸点大概在什么温度,那个温度下多保持一会儿。

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  • Insp_494cf49a

    第5楼2021/01/06

    您好,请问您说的程序升温空白是什么意思呢?是那一针不进样吗?

    上面那个谱图就是进的溶解标品的乙醚,应该就是溶剂空白吧?一堆乱七八糟的峰,那是说明乙醚不干净或者柱子不干净吗?

    安平(byron1111) 发表: 详细说说具体分析条件为好。

    建议先运行gc的程序升温空白,如果正常,无鬼峰。

    则进样溶剂,考察溶剂空白。

    如果无鬼峰,再考察样品。

    发酵液一般化学组成非常复杂,很可能问题出在样品。

    可以考虑使用较长的色谱柱,降低程序升温初始温度,降低升温速率。
    延长程序升温时间。

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  • Insp_494cf49a

    第6楼2021/01/06

    好的,谢谢您,我试试。

    请问您说的几个因素,有没有调整的顺序呢?就是先调流速、柱温,不行了再调分流比是吗?

    轶辰(m3191395) 发表:你可以分别进乙醚,直接乙醚过柱确定是乙醚还是柱子的问题。
    标品的峰在大的杂峰附近,影响出峰,可以调整流速或者柱温及分流比来改善分离度

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  • hejiahuan

    第7楼2021/01/06

    应助达人

    不知道楼主的短链脂肪酸是几个碳?

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  • 安平

    第8楼2021/01/06

    应助达人

    程序升温空白就是不进样,启动数据采集。

    建议先做一下。


    然后再怀疑溶剂

    Insp_494cf49a(Insp_494cf49a) 发表: 您好,请问您说的程序升温空白是什么意思呢?是那一针不进样吗?上面那个谱图就是进的溶解标品的乙醚,应该就是溶剂空白吧?一堆乱七八糟的峰,那是说明乙醚不干净或者柱子不干净吗?

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  • 安平

    第9楼2021/01/06

    应助达人

    如果程序升温空白排除问题。

    进样溶剂,谱图不良的话,那可以认为溶剂质量差

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  • Insp_494cf49a

    第10楼2021/01/06

    好的,我试试,谢谢您!

    安平(byron1111) 发表:如果程序升温空白排除问题。

    进样溶剂,谱图不良的话,那可以认为溶剂质量差

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