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【实战宝典】有机相对反相色谱柱保留时间影响的机理有哪些?
小官人
2021/03/22
私聊
液相色谱(LC)
解答:
(
1
)反相色谱分离保留机制可以理解为相似相溶原理,类似于从水中萃取不同化合物至有机溶剂(如辛醇),疏水(非极性)化合物更易于萃取至非极性辛醇相中。目前,比较流行的观点是疏溶剂理论,用来解释反相色谱中保留值和选择性变化的规律,并用以预测在某一分离体系或某种分离条件下的保留行为。
(
2
)疏溶剂理论是指反相色谱中,溶质分子由非极性部分与极性官能团所组成。其非极性部分与极性溶剂相相接触时,便会产生排斥力,使得自由能
ΔG
增加而熵减少。这种排斥力会引起溶质非极性部分的取向,造成流动相的混合溶剂中出现容纳分子的“空腔”。由于它是与水、溶剂、混合流动相的不相容性或疏水排斥作用所造成的,故称为疏水或疏溶剂效应。
(
3
)如果把非极性的烷基键合相看作是在硅胶表面上覆盖了一层键合的十八烷基的“分子毛”,这种“分子毛”有强的疏水特性。当用水与有机溶剂所组成的极性溶剂为流动相来分离有机化合物时,一方面,非极性组分分子或组分分子的非极性部分,由于疏溶剂的作用,将会从水中被“挤”出来,与固定相上的疏水烷基之间产生缔合作用。另一方面,被分离物的极性部分受到极性流动相的作用,使它离开固定相,减少保留值,此即解缔合过程。显然,这两种作用力之差,决定了分子在色谱中的保留行为。一般地,固定相的烷基配合基或分离分子中非极性部分的表面积越大,或者流动相表面张力及介电常数越大,则缔合作用越强,分配比也越大,保留值越大。这个缔合作用是可逆的,当流动相的极性减小(有机相比例增加)时,解缔合的倾向增加,溶质分子被洗脱;而当流动相的极性增加(有机相比例减小)时,使缔合作用增强。所以在反相键合相色谱中,流动相中有机相比例越大,物质在色谱柱上的保留时间越短,反之则越长;同一流动相条件下,极性大的组分先流出,极性小的组分后流出。
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