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【实战宝典】方法开发时需要使用保护柱么？

小官人

2021/03/22

液相色谱（LC）

问题描述：方法开发时，液相的保护柱是不是必须要装配的，不装的话影响大不大？

解答：（1）保护柱，顾名思义就是保护我们分离用的色谱柱。如果把含杂质等有害物质的样品直接注入色谱柱，杂质会在色谱柱中吸附，造成色谱柱损坏。为了防止这种情况，样品需要经过滤膜过滤后再注入色谱柱。但是滤膜有时不能完全过滤有害物质，这些残留的有害成分会导致色谱柱损坏。

（2）保护柱是和正常色谱柱填充同样的填料的迷你色谱柱（尺寸小）。在色谱分析柱前放置保护柱，样品中的有害成分就会从保护柱的上部开始累积，在保护柱全部被污染之前更换保护柱的话，正常的色谱柱就不会被污染。因此保护柱可以给色谱柱提供物理的保护，除去样品及流动相中的颗粒；也可以提供化学的保护，防止分析柱被化学污染。

（3）保护色谱柱的价格，通常是对应正常色谱柱的1/10~1/3，很好的利用保护柱能延长正常色谱柱的使用寿命，是非常经济有效的措施。

（4）加上保护柱以后相当于增加了色谱分析柱长度，会导致系统压力升高，影响泵的使用寿命；也会延长待测物保留时间，降低工作效率。液相色谱仪一般没有设计专门放置保护柱的空间，保护柱加在柱温箱外部的话，由于温度不稳定，会对分离产生一定影响。另外保护柱长度相对较短，填料粒径一般与色谱柱大，理论塔板数较低，所以保护柱在用过一段时间后容易出现拖尾或杂峰，这时就应更换保护柱了。

综上所述，色谱柱前端的保护柱不是必备品，这里需要考量权衡保护柱与色谱柱损耗的平衡，加不加保护柱要看样品和色谱柱本身。对于比较便宜的色谱柱，保护柱性价比就不高了，这样的色谱柱也可以不使用保护柱。另外，硅胶柱的寿命本身就非常短，使用保护柱意义不大。反过来说，对于需要延长使用寿命的聚合物基质色谱柱，使用保护柱还是非常有效果的。近年来出现的超高效液相色谱柱填料粒径非常小（一般<2 μm），样品脏的话很容易造成堵塞和残留，价格也比普通色谱柱贵很多，这种色谱柱最好在前端加装保护柱。

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