问题描述：采用HJ 638-2012测定环境空气中12种酚类化合物，C18色谱柱，乙腈和水梯度洗脱，缺了3个峰。更换为甲醇：水（V/V）=45：55等度洗脱，缺两个峰，且出峰顺序不对，是什么原因？
解答:（1）由于酚类化合物在甲醇流动相中最大吸收峰在190~230nm之间，在233nm处，酚类化合物有很好的分离度和吸收。但在此波长下，酚类受甲醇的干扰严重，有较强的溶剂峰，所以标准将流动相改为水和乙腈，但标准溶液仍旧采用甲醇作为溶剂。
（2）在实际做样的过程中，可以改变流动相配比来解决，比如采用乙腈水（含0.1%的乙酸或0.5%乙酸），同时流速改为1mL/min，这样既可以减少溶剂峰干扰，也能够将目标物分离的更好，同时波长也可以选择274nm或者280nm，这样有抑制样品前处理以及标准物质中甲醇基质的干扰的作用。可参考如下条件：流动相A为0.1%乙酸-水，B为乙腈；梯度洗脱程序：0~25min，20%~70% B；25~30min，70~100% B，35~40min，100%~20%B；运行时间45min。
（3）至于出峰顺序不对的情况，使用C18色谱柱，250mm×4.6mm，峰图跟标准中图谱后四个峰不一样，实测倒数第4个是2-萘酚，而标准是倒数第3个，见图6-36。
图6-36标准中酚类化合物标准色谱图
1—2,4-二硝基苯酚；2—2,4,6-三硝基苯酚；3—1,3-苯二酚；4—苯酚；5—3-甲基苯酚；6—4-甲基苯酚；7—2-甲基苯酚；8—4-氯苯酚；9—2,6-二甲基苯酚；10—2-萘酚；11—1-萘酚；12—2,4-二氯苯酚
其实，在混标定性过程中，有个很常见的现象就是出峰顺序的问题，标准物质厂商提供的谱图也有与标准不完全一致的情况，如图6-37所示。
图6-37标准物质厂商提供的酚类物质色谱图
1—1,3-苯二酚；2—苯酚；3—苦味酸；4—3-甲基苯酚、4-甲基苯酚；5—2-甲基苯酚；6—2,4-二氯苯酚；7—4-氯苯酚；8—2-萘酚；9—2,6-二甲基苯酚；10—1-萘酚；11—2,4-二硝基苯酚
在做混标曲线的过程中，如果不能进行单标或质谱定性，可以根据标准物质证书上的条件进行做样，和证书上的谱图进行比对，如果出峰数目不对或者出峰顺序有问题，可以与标准物质厂家进行确认。
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