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菌种的超低温冷藏一般选择什么容器?

食品毒素/微生物检测

  • 菌种的超低温冷藏一般选择什么容器?望老师不吝赐教
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  • dahua1981

    第1楼2021/04/30

    应助达人

    液氮超低温保存
    (1)安瓿管 一般要求用95%料或GG17的玻管制作,以能承受巨大的温差变化而不破损,大小根据需要而定。用印同在管壁上书写菌号,160℃烘干,加棉塞灭菌备用。
    (2)菌种准备 在最适培养基斜面上培养得到健壮菌种,制成悬浮液,如为不产孢子的真菌,则采用斜面或液体振荡培养,制成菌丝片段。将菌悬淮分装至灭菌安瓿管中,每管0.2~0.5ml,然后用火焰将安瓿熔封。
    3)冻结 将熔封后的安瓿管入大慢速冻结器上,以每分钟下降1℃的速度冷冻,当安瓿管温度下降至-35℃时,即可把安瓿管移入液氮内作长期保藏。
    (4)菌种的复苏培养 直至全部溶化为止,当溶化后即开启安瓿移至培养基内培养,扣作时应特别注意安全,防止爆炸或冻伤,不宜戴线手套,要戴皮手套操作。

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  • JOE HUI

    第2楼2021/04/30

    应助达人

    液氮超低温保藏法是现在保存微生物菌种*牢靠的办法,多数*级菌种保藏单位都采用此法。自增压液氮罐

    1、准备安培管 用于液氮保藏的安培管,要求能耐受温度忽然改变而不致决裂,因而,需求采用硼硅酸盐玻璃制造的安培管。安培管的大小通常使用75×10mm的安培瓶。

    2、加保护剂与灭菌 保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易涣散的细胞时,则将空安培管塞上棉塞,在压力0.11MPa,温度121℃条件下灭菌15min;若保存霉菌菌丝体则需在安培管内预先参加保护剂,如10%的甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液,参加量以能浸没今后参加的菌种块为限,而后再进行高压灭菌。


    3、接入菌种 将菌种用10%的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液,装入已灭菌的安培管;霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器,从平板内切取菌落圆块,放入含有保护剂的安培管内,然后用火焰熔封。浸入水中检查有无缝隙。

    4、冻住 再将已封口的安培管以每分钟下降1℃的慢速冻住至-30℃。若细胞急剧冷冻,则在细胞内会构成冰的结晶,因而下降存活率。

    5、保藏 经冻住至-30℃ 的安培管当即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内,然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150℃,液态氮为-196℃。

    6、恢复培养 保藏的菌种需求用时,将安培管取出,当即放入38~40℃的水浴中进行急剧冻结,直到全部融化为止。再打开安培管,将内容物移到适宜的培养基上培养

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