dahua1981
第1楼2021/04/30
应助达人液氮超低温保存
(1)安瓿管 一般要求用95%料或GG17的玻管制作，以能承受巨大的温差变化而不破损，大小根据需要而定。用印同在管壁上书写菌号，160℃烘干，加棉塞灭菌备用。
(2)菌种准备 在最适培养基斜面上培养得到健壮菌种，制成悬浮液，如为不产孢子的真菌，则采用斜面或液体振荡培养，制成菌丝片段。将菌悬淮分装至灭菌安瓿管中，每管0.2～0.5ml，然后用火焰将安瓿熔封。
3)冻结 将熔封后的安瓿管入大慢速冻结器上，以每分钟下降1℃的速度冷冻，当安瓿管温度下降至-35℃时，即可把安瓿管移入液氮内作长期保藏。
(4)菌种的复苏培养 直至全部溶化为止，当溶化后即开启安瓿移至培养基内培养，扣作时应特别注意安全，防止爆炸或冻伤，不宜戴线手套，要戴皮手套操作。
JOE HUI
第2楼2021/04/30
应助达人液氮超低温保藏法是现在保存微生物菌种*牢靠的办法，多数*级菌种保藏单位都采用此法。自增压液氮罐
1、准备安培管 用于液氮保藏的安培管，要求能耐受温度忽然改变而不致决裂，因而，需求采用硼硅酸盐玻璃制造的安培管。安培管的大小通常使用75×10mm的安培瓶。
2、加保护剂与灭菌 保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易涣散的细胞时，则将空安培管塞上棉塞，在压力0.11MPa，温度121℃条件下灭菌15min;若保存霉菌菌丝体则需在安培管内预先参加保护剂，如10%的甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液，参加量以能浸没今后参加的菌种块为限，而后再进行高压灭菌。
3、接入菌种 将菌种用10%的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液，装入已灭菌的安培管;霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块，放入含有保护剂的安培管内，然后用火焰熔封。浸入水中检查有无缝隙。
4、冻住 再将已封口的安培管以每分钟下降1℃的慢速冻住至-30℃。若细胞急剧冷冻，则在细胞内会构成冰的结晶，因而下降存活率。
5、保藏 经冻住至-30℃ 的安培管当即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150℃，液态氮为-196℃。
6、恢复培养 保藏的菌种需求用时，将安培管取出，当即放入38～40℃的水浴中进行急剧冻结，直到全部融化为止。再打开安培管，将内容物移到适宜的培养基上培养
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