仪器信息网APP

选仪器、听讲座、看资讯

立即体验

当前位置：仪器社区 >色谱 > 液相色谱（LC） > 帖子详情

中国药典四部0722维生素D测定法，平行性极差，有哪些应该注意的细节呢？

还是肉好吃

2021/07/27

液相色谱（LC）

使用第二法，反相净化，正相定量，但是同时取四份样品做出来，含量有90%-110%不等

前处理的步骤较多，不知道有哪些需要特别注意的地方

望有经验的老师指点一二

相关话题

dahua1981

第1楼2021/07/27

应助达人

01 前处理：

按照《中国药典》2020年版四部通则0722维生素D测定法第四法要求进行制备。

02 分析条件：

第一维色谱柱：HILIC-10（2.1x150 mm，3 μm）

第二维色谱柱：RX-SIL（3.0x100 mm，1.8 μm）

第一维流动相：A相：正己烷；

B相：正己烷-正戊烷-异丙醇（98：1：1）；

按下表程序进行梯度洗脱

第二维流动相：正己烷-正戊醇-异丙醇（996：2：2），等度洗脱

流速：0.5 mL/min

进样体积：100 μL

柱温：40℃

检测波长：265 nm

收集管：聚醚醚酮（peek）管，内径0.0762 cm（0.03英寸），20 m，容积约9 mL

03 对照品溶液色谱图：

取方法中的校正因子f2上机测试，得到对照品溶液色谱图。其中第一维液相维生素D的理论塔板数超过2500，与前维生素D的分离度＞5；各峰的重复性为0.76%~1.46%（n=5），均满足药典的要求。

图2. 对照品溶液第一维色谱图（上）和第二维色谱图（下）

04 供试品溶液色谱图：

取制备好的供试品溶液上机分析。在第一维色谱图中，由于维生素A醇和油脂的干扰，前维生素D被大量杂质峰包裹，无法检测；将该时间段的物质切入第二维色谱中继续分析，前维生素D和维A醇、油脂等杂质在第二维色谱图中得到了有效的分离。

图3. 供试品溶液第一维色谱图（上）和第二维色谱图（下）

0

lijing320323

第2楼2021/07/27

咨询工程师

0

还是肉好吃

第3楼2021/07/27

那个……我是用第二法，没有第四法的仪器呀
dahua1981(dahua1981) 发表:01 前处理：按照《中国药典》2020年版四部通则0722维生素D测定法第四法要求进行制备。 02 分析条件：第一维色谱柱：HILIC-10（2.1x150 mm，3 μm）第二维色谱柱：RX-SIL（3.0x100 mm，1.8 μm）第一维流动相：A相：正己烷；B相：正己烷-正戊烷-异丙醇（98：1：1）；按下表程序进行梯度洗脱第二维流动相：正己烷-正戊醇-异丙醇（996：2：2），等度洗脱流速：0.5 mL/min 进样体积：100 μL柱温：40℃ 检测波长：265 nm收集管：聚醚醚酮（peek）管，内径0.0762 cm（0.03英寸），20 m，容积约9 mL 03 对照品溶液色谱图：取方法中的校正因子f2上机测试，得到对照品溶液色谱图。其中第一维液相维生素D的理论塔板数超过2500，与前维生素D的分离度＞5；各峰的重复性为0.76%~1.46%（n=5），均满足药典的要求。图2. 对照品溶液第一维色谱图（上）和第二维色谱图（下） 04 供试品溶液色谱图：取制备好的供试品溶液上机分析。在第一维色谱图中，由于维生素A醇和油脂的干扰，前维生素D被大量杂质峰包裹，无法检测；将该时间段的物质切入第二维色谱中继续分析，前维生素D和维A醇、油脂等杂质在第二维色谱图中得到了有效的分离。图3. 供试品溶液第一维色谱图（上）和第二维色谱图（下）

0

安平

第4楼2021/07/28

应助达人

标准品和控制样品的重复性和准确度是否正常呢？

0

还是肉好吃

第5楼2021/07/28

控制样品没有做过，
系统适用性连续5针rsd＜1%
前几天对照品平行性很好
今天不知道怎么回事做出来对照品峰面积有点跳
安平(byron1111) 发表: 标准品和控制样品的重复性和准确度是否正常呢？

0

近期热榜

热门活动

猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐

品牌合作伙伴

日立科学仪器

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）

日本电子株式会社

赛默飞世尔科技

马尔文帕纳科

上海仪电科仪

梅特勒托利多

布鲁克核磁

举报帖子

点赞用户

好友列表

加载中...

正在为您切换请稍后...