怎么设置梯度把最近的几个峰分开

参考一下文献

一、建立梯度方法的原因

Q 为什么要用梯度的方式来洗脱呢？

当然，作为分析工作者，如果能以一个等度的条件完成我们的分离目的，那便是是皆大欢喜的，但实际情况常常不能如我们所愿。混合样品组分中，必定存在容易分离和不易分离的组分，保留较弱和保留较强的组分。

我们建立梯度洗脱程序的目的就在于，将容易分离的组分在洗脱能力较弱的流动相中实现尽快分离，而保留较强的组分在色谱柱内停留较长时间，与键合相表面发生充分的相互作用，尽可能地彼此拉开，最后用强洗脱能力的流动相洗脱出来，避免洗脱时间过长。

二、反相液相色谱体系流动相的洗脱能力

Q 前文既然讲到了流动相的洗脱能力，那么，反相色谱中，如何来判断流动相的洗脱能力呢？

我们可以来看一下下面这张图：

在梯度（二）中，10min时乙腈的比例为45%，而梯度（一）下10min时乙腈的比例为60%，并且梯度（二）中的后7min，乙腈的比例也并未继续升高至100%，这就使得梯度（二）条件中，每时每刻乙腈的比例都低于梯度（一），暨每时每刻流动相的洗脱强度都弱于梯度（一），如下图。如此一来，各杂质共洗脱的情况得到改善，结果就是如图3所示，8个物质都得到了分离。



四、注意事项

在进行方法开发梯度优化的时候，一定要注意兼容性的问题，包括流动相溶剂彼此之间的兼容性，以及流动相和样品的兼容性。

流动相溶剂选择上，最h是选择能够任意比例互溶的溶剂。若是流动相溶剂不方便更换，则需尽量减缓流动相的变化速率，给有机相和水相（盐相）更多的时间来互溶。

对于样品来说，流动相的性质一定要注意与样品溶剂能够兼容，避免出现在进样后的任意时刻样品不溶解、析出的情况。

这个比较困难了，您的目标峰响应不太好。从出峰时间和现在的洗脱程序看，出峰前后实际上是等度洗脱。等度洗脱尚如此，梯度洗脱就更不好操作了。