Aglent 1260 RRLC-QQQ 液质联用仪操作程序

memory光阴

2021/11/30
菜鸟分析队

私聊

液质联用（LCMS）

1.目的

建立一个文件以规范Agilent 1200/1260 RRLC-6430/6460 QQQ 液质联用仪的操作过程。

2.范围

适用于Agilent 1200/1260 RRLC-6430/6460 QQQ 液质联用仪。

3. 操作程序

3.1 开机

3.1.1 确认氮气和高纯氮气供应，调节液氮罐的输出压力为 0.56-0.69MPa（80-100psi），调节高纯氮气钢瓶减压表输出压力小于 0.2 MPa (一般为约0.15MPa 或 10-30Psi）。同时确认前级泵的气镇阀处于关闭状态。

3.1.2 准备LC流动相。检查管线连接状态。

3.1.3 打开计算机，进入Windows Vista系统。

3.1.4 打开 QQQ的电源开关(左下角)，此时听到一声电磁阀的声音，前级泵启动，然后涡轮泵开始工作，打开 LC1200/1260各电源开关，等待大概2min后，质谱初始化完毕。

3.1.5 执行 Start—Programs-Accessories—Command Prompt打开 Dos提示符，输入命令

Ping 192.168.254.11(LC) 和192.168.254.12 (MSMS)，如下图观察是否电脑与液相和质谱通讯正常（注：此步骤非必须）。

3.1.6 如果结果显示通讯正常，回到桌面启动Data Acquisition图标，进入Masshunter工作站，并听到另外一声电磁阀的声音，表示仪器通讯正常。

If it shows the connection is normal, then go back to the desktop and click Data Acquisition icon to enter into Masshunter work station. When you heard a voice of

3.1.7 等待MS抽真空，当粗真空达到1.8～2.0 Torr，高真空达到3X10-5Torr的水平后，从Acquisition 切换到Tune界面，选择Autotune 对仪器进行调谐，保存调谐文件。

3.2 数据采集方法编辑

3.2.1 双击MassHunter数据采集图标，在 Acquisition界面，输入LC、MS相应参数，并保

存方法。 LC参数主要包括：溶剂传输系统--泵，样品引入系统--自动进样器，样品冷却系统—冷却器，样品分离系统--色谱柱，控温系统--柱温箱。MS 参数主要包括：调谐文件的选择，MSD信号获取方式（MRM or MS2 SIM等），离子化模式正模式或负模式，离子源，母离子和子离子的选择。Fragmentor电压，碰撞能量，干燥气温度，干燥气流速，雾化气的压力，及毛细管电压的设置。

3.2.2 在Worklist编辑界面点击左键，选择Add Multiple Samples，填写样品信息表格。转

到Sample Position表格，选择样品被分析的位置，点击OK按钮。指定样品出现在Worklist，编辑样品名称、分析方法等选项，保存Worklist，按“Run Worklist”运行分析列表。

3.3 数据定量分析方法编辑

3.3.1 运行“Agilent MassHunter Quantitative Analysis” 软件，单击菜单项 File →New

Batch，在新的批处理对话框，找到需处理数据的文件夹，输入批处理文件名并单击Open按钮创建一个新的批处理文件。

3.3.2? 单击菜单项 File → Add Samples，在 Add Sample 对话框，单击选择来添加所需分

析的样品。单击菜单 Method → New → New Method from Acquired MRM Data…用鼠

标光标指向校正表中最高浓度的样品文件夹并选择“Open”按钮导入MRM方法采集信息。

3.3.3 检查导入的用于MRM化合物设置的采集参数

单击保留时间设置“ Retention Time Setup ”检查确认导入的参数（建议在样品分析时尽量按保留时间分组，以免干扰）；单击方法设置任务 Method Setup Tasks→ ISTD，然后从下拉菜单“ISTD Compound Name”为每个目标化合物指定内标化合物（ISTD），并在ISTD Conc 列输入相应内标的浓度；单击方法设置任务Method Setup Tasks→ Concentration Setup，输入校正表中最高浓度（Dil. High Conc）以及稀释模式（Dil. Pattern），确认浓度级别名称（Level Name Prefix），然后选择创建级别（Create Levels），单击菜单然后复制校正级别到… Method → Copy Calibration Levels To…在复制校正级别对话框，单击选择所有（Select All）对话框，然后单击OK 按钮，关闭化合物信息窗口；单击方法设置任务Method Setup Tasks→ Qualifier Setup，检查限定离子设置（Check Qualifier Setup）参数，在导入MRM方法采集参数时限定离子参数应该自动产生; 单击方法设置任务-校正曲线设置 Method Setup Tasks→ Calibration Curve Setup, 检查每个目标化合物曲线拟合（Curve Fit）的缺省设置。

3.3.4? 单击 Save/Exit→ Validate 验证方法设置，单击 Save/Exit→ Exit，然后选择Yes 应用方法到此批处理表。在工具栏上单击分析批处理（Analyze Batch）图标启动批处理分析。检查显示在批处理表（ Batch Table）上的批处理分析结果，化合物信息和校正曲线显示在分析结果的下部。单击 File→ Save Batch，选择菜单Report → Generate，选择一个或多个模板(*.XLT files)生成报告，然后通过微软Excel打印报告。

3.4 关闭仪器

3.4.1 点击Data Aquisition，仪器控制界面，使泵、柱温箱、MS均处于“OFF”状态。

3.4.2 点击MS QQQ图标，选择Vent（点击Vent前，确认前级泵气镇阀（Gas Blast Valve）处于关闭状态，以防返油造成系统内部严重污染，观察涡轮泵转速以及四极杆和干燥气的温度，等待大概20-30min 左右，等待涡轮泵转速完全停下来，且干燥气温度和四极杆温度下降到50℃以下，可能出现提示（视软件版本而异）。

切记:关机前要确保机械泵的BALLAST阀是关闭的! 禁止用电源强行关机!

3.4.3 关闭MassHunter软件，然后点击桌面Acq System Launcher 图标，然后选择Shutdown 关闭运行程序。关闭MS QQQ 和LC1200/1260 各模块电源开关。关闭计算机和显示器，关闭液氮罐开关阀。

4. 仪器日常维护

4.1 仪器定期维护

4.1.1 每天：检查流动相体积，检查色谱柱的压力，检查气体压力。

4.1.2 1-2天：清洁雾化室，移开高压网清洗绝缘体，用50%异丙醇冲洗电离室，用无尘布蘸取甲醇或50%异丙醇擦洗，清洗喷雾针并检查喷雾针位置。

4.1.3 每周：检查粗真空泵油的液面及颜色,打开气镇阀约30分钟振气, 切记一定要关好。检查和清洗自动进样针。每6个月需要更换泵油。

4.1.4 每周对仪器进行checktune。

4.1.5 调谐质谱：对于以下情况要进行Autotune:

a. Checktune 不能通过;

b.仪器初次开机或长时间关机状态后开机;

c. 清洗了毛细管、skimmer、八极杆等光学组件或者移机时;

d. 正常情况下，一月做一次Autotune，保存调谐文件。

4.2 仪器必要维护

4.2.1 观察到信号强度或稳定性降低时，需清洗或更换MSD中的毛细管,清洗或更换毛细管一定是在卸掉真空时操作。

毛细管的清洗方法(注: 操作时要带无尘手套):

a. 溶解1g Alconox 到100mL超纯水中;

b. 用1mL的移液枪枪头套住毛细管两端保护金属涂层, 枪头剪到大约4 cm以便毛细管可以浸到溶液中;

c. 将毛细管竖直放在100mL聚丙烯量筒中, 充满 Alconox溶液, 超声量筒大约10-15min;

d. 用超纯水冲洗毛细管和量筒几次;

e. 在量筒中充满超纯水,超声10-15分钟;

f. 取出毛细管,移掉枪头( 如果有必要);

g. 氮气吹掉毛细管中的水,待安装.

4.2.2 如泵油液面下降至最低刻度以下则需加泵油；如泵油混浊或发黄则需将泵油倒出并倒入新的泵油，油液面不能超过最高刻度线。

4.2.3 定期清洗溶剂过滤器（采用30-40%的硝酸浸泡1h后，超纯水冲净酸，溶剂吸滤头为陶瓷材质，不可超声清洗）。

4.2.4 根据情况更换purge阀滤芯（Purge阀打开，设置纯水为流动相，流速5ml/min，压力超过10bar时需更换）。

4.2.5 定期用酒精棉签擦拭针座，以防止灰尘污染堵塞针与针座。

4.2.6 定期检查质谱仪六通阀前的在线过滤器，如颜色发黄、发暗需更换。

4.2.7 定期检测器电子倍增管电压，如超过2000V需提前订购以备更换。

5. 仪器使用环境

5.1 正常使用温度范围15℃－30℃，允许使用温度范围4℃－35℃。

5.2 允许使用湿度范围小于85％。

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