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HPLC顽固残留去污记

通标小菜鸟

2023/08/01
菜鸟分析队

液相色谱（LC）

HPLC顽固残留去污记
通标小菜鸟

近日在用液相对样品进行日常测试的时候，偶然发现目标峰走出来的峰型有点异常，正常的时候目标峰出峰位置处就是平齐的基线，不会有波动和鼓包，目标物色谱峰峰底处变宽。这种情况对于纯度测试会产生不利影响，主峰峰面积会偏高。

查看了过往的样品测试记录，这种情况是在某一点开始的，之后走的样品均出现不同程度的异常。起初以为是样品基底本身带来的干扰影响，后来通过连续运行多次空白发现并不是样品本身引起，而是仪器系统带来的残留干扰。

为了解决这一问题，尽快让测试恢复正常，于是便开始查找原因。最先排查的是色谱柱，因为色谱柱是比较容易有残留的，将这根一直用的色谱柱拆下，接在另外一台仪器上运行空白，发现有残留鼓包，说明这根色谱柱本身的确是有残留存在的。

于是采取措施，将色谱柱重新接好，加大有机相比例，低流速冲洗柱子和整个系统，同时在冲洗的过程中提高柱温，以便让残留更快的流出。经过了长时间的冲洗后，需要检查此法是否有效，通过进空白发现原先的残留鼓包有明显缩小，说明冲洗起码起效了。继续按照此法进行冲洗，后续发现鼓包基本维持稳定，不再继续缩小。为验证是否除柱子以外液相系统管路也有残留，便拿了另外一根同尺寸同型号的色谱柱替换被冲洗的柱子，运行空白后发现残留鼓包也是有的，这根柱子在另外一台仪器上走没有残留，换到这台仪器上走就有残留，说明除了之前有残留的色谱柱以外，仪器系统内部管路也有顽固残留。

为了去除仪器系统残留，首先把所有的流动相都换新，包括洗针溶液，换完后继续冲洗柱子及整个系统，每冲一段时间走一针溶剂空白，看看残留是否有所变化，然而还是效果不佳。通过与同事之间的讨论，发现之前忽略了进样系统这一块，这里也是很容易出现残留污染的，但是平常冲柱以及冲洗管路都是无法顾及到这里的。

虽然平常走样都设置了洗针，但洗针每次进样量也只有5ul，可能无法完全冲洗干净，特别是样品环以及计量泵那一部分。随后便对进样管路这一段进行冲洗，准备空白溶剂至2ml进样小瓶，设置进样体积至最大100ul，此时在进样的时候就有足够大体积的溶剂冲洗进样管路。然后编辑方法，将运行程序设置为1分钟，进样体积为100ul，编辑序列设置多次连续进样，这样就能充分用空白溶剂冲洗进样系统了。在序列运行完毕后，恢复至初始运行方法，走了一针空白溶剂，发现果然有效，原先的残留清除殆尽，顽固残留问题也就迎刃而解了。

总结：在平常样品分析过程中，如果遇到样品浓度较高或者基质比较复杂的样品，我们一定要在运行之后设置足够的冲洗程序来将可能的残留冲走。就像我上面提到的，可以设置一个空白洗针程序，设置大的进样体积，在样品序列后面走几针，这样可以有效避免残留污染问题，同时也能提高色谱柱的寿命。

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Ins_194b59f7

第1楼2023/08/02

你好，没看明白100ul是怎么用的？
是修改洗针的体积还是多编辑一个测试方法，进样用空白溶剂，进样量100ul？

5

通标小菜鸟

第2楼2023/08/02

应助达人

多编辑一个采集方法，程序设个两三分钟，把进样体积改为100ul，这个100ul只针对安捷伦1260仪器，其它仪器进样体积上限可能不一样，然后在进样小瓶内装入空白溶剂，就当运行样品序列
Ins_194b59f7(Ins_194b59f7) 发表:你好，没看明白100ul是怎么用的？是修改洗针的体积还是多编辑一个测试方法，进样用空白溶剂，进样量100ul？

5

通标小菜鸟

第3楼2023/08/04

应助达人

欢迎大家点赞评论

5

Ins_2afdcd94

第4楼2023/08/04

1329进样器的话，默认定量环是100微升，还可以换环，大体积进样

4

通标小菜鸟

第5楼2023/08/05

应助达人

100ul多进几次也一样，而且也没有备其它体积的进样环
Ins_2afdcd94(Ins_2afdcd94) 发表:1329进样器的话，默认定量环是100微升，还可以换环，大体积进样

4

memory光阴

第6楼2023/08/05

应助达人

感谢楼主分享，给我们日常分析过程中残留排查提供了一个大致的思路，不过平常分析高浓度样品的时候还是要谨慎一点

3

通标小菜鸟

第7楼2023/08/06

应助达人

是的，平常多注意冲洗，对于高浓度样品最好稀释或者减少进样量，这样可以降低仪器被污染的概率
memory光阴(Ins_91d3b22d) 发表:感谢楼主分享，给我们日常分析过程中残留排查提供了一个大致的思路，不过平常分析高浓度样品的时候还是要谨慎一点

3

Ins_baeeaeb7

第8楼2023/08/06

平常走样还可以设置洗针溶液，这样能保证进样后冲一下

2

油条豆浆

第9楼2023/08/07

残留解决也是一个问题

1

Insp_41babaed

第10楼2023/08/17

太棒了，又学到了，常学常新

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