GPC的应用之植物油中9种抗氧化剂的测定分享

GPC的应用之植物油中9种抗氧化剂的测定分享

Q：实验室配置了GPC，有什么用呢？

A：样品的性质不同，对应的分离原理不同，如果前处理过程中增加GPC，等于增加了分离或净化的过程。

在对各类食品、农产品、水产品和中药材中的农残、半挥发性有机物分析时，样品中一般会含有大分子物质（如色素、油脂等），如果不去除这些物质，会影响最终的分析结果及色谱柱的使用寿命。

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针对此问题，在农残、半挥发性有机物的样品分析前，必须进行有效的净化前处理。如果实验室中有GPC那就事半功倍了。接下来我们不妨了解一下GPC在液相中的应用。

GPC的分离原理

一种含有不同分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下运动和无定向的扩散运动。

大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。

小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出。

样品洗脱图

GPC的作用：

? 净化样品，去除样品中的大分子基质或者小分子干扰物质，净化后适合采用GC, HPLC，GCMS等仪器的分析，例如食用油中抗氧化剂、多环芳烃等的测试，须通过凝胶净化前处理方式去除油脂的等干扰物，将待分析物和干扰物分离开。

? 保护分析仪器及色谱柱，防止大分子物质堵塞后续分析用色谱柱及仪器。

GPC的应用案例：

1. 适用范围

食品中PG、THBP、TBHQ、NDGA、BHA、Ionox-100、OG、DG和BHT等九种抗氧化剂的测定。

参考标准

《GB 5009.32-2016 食品安全国家标准 食品中9种抗氧化剂的测定》。

2.原理

油脂样品经有机溶剂溶解后，使用凝胶渗透色谱（GPC）净化。

3.标准溶液的配置

分别称取没食子酸丙酯（PG)，叔丁基对苯二酚（TBHQ)，去甲二氢愈木创酸（NDGA)，叔丁基对羧基茴香醚（BHA），2, 6-二叔丁基－4-羧甲基苯酚（lonox-100)，没食子酸辛酯（OG)，2, 6-二叔丁基对甲基苯酚（BHT)，没食子酸十二酯（DG)10mg，用乙腈溶解并定容到10mL，得1000μg/mL的单标。

称取2, 4, 5-三羧基苯丁酮（THBP)1mg，用乙腈溶解并定容到10mL,得单标100μg/mL。

流动相配制：1L环己烷和1L乙酸乙酯等比例混匀。

4.提取步骤

精确称取取1g油样于10ml容量瓶中，以流动相定容至刻度，待净化。

加标过程：精确称取取1g油样于10ml容量瓶中，精确加入0. 2mL 100 μg/mL 9种抗氧化剂混标，以流动相定容至刻度，得加标量为20mg/kg,上机浓度为5μg/mL。

5.凝胶色谱净化条件

GPC谱图

6. 液相色谱分析条件

色谱柱：月旭Ultimate® XB-C18，5um ，4.6×250mm

流动相：A：0.5%甲酸水溶液；B：甲醇

流速：1mL/min

进样量：5μL

柱温：35℃

检测波长：280nm

梯度洗脱表：

植物油经过GPC净化后谱图

9种抗氧化剂混标5μg/mL谱图

植物油加标20mg/kg过GPC后谱图

结果展示

GPC-1600凝胶色谱仪加标回收率汇总表