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桔梗化学成分的提取分离

  • Insp_4125fa38
    2023/10/07
  • 私聊

中药/天然药检测

  • 桔梗化学成分的提取分离

    1 桔梗化学成分提取分离流程


    桔梗干燥根药材(10 kg),置于大型中药提取器中,以6倍量75%的乙醇浸泡过夜,加热回流提取3次,每次3 h,合并三次提取液,减压回收乙醇。将浓缩液用等体积的石油醚、乙酸乙酯分别萃取3次,剩余水溶液浓缩约3 L,经D101大孔吸附树脂,分别用水,30%乙醇水,60%乙醇水和95%乙醇水依次洗脱,得60%乙醇水洗脱部分浓缩后得浸膏90 g

    60 %乙醇洗脱部分经(200-300目)柱色谱,以二氯甲烷-甲醇梯度洗脱(501251121613111)。将二氯甲烷-甲醇(11)馏分再经硅胶柱层析、反相ODS柱色谱,反相半制备高效液相色谱最终分离得到白色粉末状Compound 1Compound 2;将二氯甲烷-甲醇(31)馏分再经硅胶柱层析、反相制备高效液相色谱,反相半制备高效液相色谱最终分离得到白色粉末状Compound 3Compound 4。其具体分离流程如图1所示:



    图1 提取分离流程图

    2 化合物结构鉴定

    Compound 1白色粉末(甲醇)。1H-NMR300MHz ,pyridine-d5 δ1.003H,s,H-29, 1.083H,s,H-30, 1.123H,s,H-26, 1.393H,s,H-27, 1.683H,s,H-25,1.683H,br.s,CH3-Rha)及不饱和双键氢δ5.631H,br.s,12-H)。13C-NMR150MHz, pyridine-d5δ45.3C-1, 68.7C-2, 88.7C-3, 48.2C-4, 47.6C-5, 19.4C-6, 33.3C-7, 40.6C-8, 45.3C-9, 38.0C-10, 24.1C-11, 123.3C-12, 144.4C-13, 42.5C-14, 36.1C-15, 74.0C-16, 49.7C-17, 41.6C-18, 47.2C-19, 31.0C-20, 36.1C-21, 32.2C-22, 63.2C-23, 67.5C-24, 19.1C-25, 17.7C-26, 27.1C-27, 176.0C-28, 33.6C-29, 24.8C-30

    13C-NMR data of sugarsGlucoseinner: 106.1C-1, 74.9C-2, 78.4C-3,72.4C-4,76.5C-5,70.4C-6; Glucosecenter: 105.0C-1, 75.3C-2,78.5C-3, 71.3C-4, 77.2C-5,70.2C-6; Glucoseterminal:105.6C-1, 75.4C-2,78.7C-3,70.9C-4,77.7C-5,62.7C-6; Arabinose: 93.6C-1, 75.3C-2, 71.6C-3, 66.3C-4, 63.3C-5; Rhamnose: 101.2C-1, 72.0C-2, 72.7C-3, 83.6C-4, 68.7C-5, 18.4C-6; Xylose: 106.9C-1, 76.1C-2, 78.6C-3, 71.1C-4, 67.5C-5。该化合物数据与文献报道基本一致]。故鉴定化合物1为去芹糖桔梗皂苷E,结构式如图2所示

    2 化合物1结构式



    Compound 2白色粉末(甲醇)。1H-NMR300MHz,pyridine-d5δ1.003H,s,H-29, 1.113H,s,H-30, 1.083H,s,H-26, 1.363H,s,H-27, 1.693H,s,H-25,1.693H,br.s,CH3-Rha)及不饱和双键氢δ5.801H,br.s,12-H)。13C-NMR150MHz ,pyridine-d5δ45.3C-1,68.8C-2,88.4C-3,48.2C-4,47.6C-5,19.5C-6,33.5C-7,40.6C-8,45.0C-9,38.0C-10,24.1C-11,123.3C-12,144.4C-13,42.5C-14,36.1C-15,73.9C-16,49.8C-17,41.7C-18,47.2C-19,31.0C-20,36.1C-21,32.2C-22,63.6C-23,67.0C-24,19.2C-25,17.7C-26,27.1C-27,176.1C-28,33.3C-29,24.8C-30)。

    13C-NMR data of sugarsGlucoseinner:106.1C-1,74.9C-2,78.4C-3,72.4C-4,76.6C-5,70.6C-6; Glucose(center): 105.0C-1, 75.3C-2,78.5C-3, 71.3C-4, 77.2C-5,70.2C-6; Glucoseterminal:105.7C-1, 75.2C-2,78.7C-3,70.9C-4,77.7C-5,62.7C-6; Arabinose: 93.7C-1, 75.5C-2, 71.6C-3, 66.5C-4, 63.1C-5; Rhamnose: 101.3C-1, 71.9C-2, 72.8C-3, 83.9C-4, 68.6C-5, 18.4C-6; Xylose: 106.8C-1, 75.8C-2, 84.9C-3, 69.5C-4, 67.0C-5; Apiose:111.3C-1, 77.9C-2, 80.6C-3, 75.3C-4, 65.4C-5)。该化合物数据与文献报道基本一致,故鉴定化合物2为桔梗皂苷E,结构式如图3所示。

    图3 化合物2结构式



    Compound 3:白色粉末(甲醇)。1H-NMR300MHz,pyridine-d5δ0.993H,s,H-29, 1.073H,s,H-30, 1.113H,s,H-26, 1.353H,s,H-27, 1.683H,s,H-25,1.683H,br.s,CH3-Rha)及不饱和双键氢δ5.631H,br.s,12-H)。13C-NMR75MHz,pyridine-d5 δ45.0C-1, 68.2C-2, 88.1C-3, 47.2C-4, 47.9C-5, 19.2C-6, 33.2C-7, 40.2C-8, 44.5C-9, 37.7C-10, 24.1C-11, 123.3C-12, 144.0C-13, 42.1C-14, 35.7C-15, 73.6C-16, 49.4C-17, 41.3C-18, 46.8C-19, 30.6C-20, 35.7C-21, 31.8C-22, 63.3C-23, 67.1C-24, 18.8C-25, 17.3C-26, 26.7C-27, 175.7C-28, 32.9C-29, 24.4C-30

    13C-NMR data of sugarsGlucoseinner:105.8C-1,74.5C-2,78.3C-3,71.8C-4,76.2C-5,70.2C-6; Glucoseterminal: 104.7C-1,75.2C-2,78.5C-3,69.1C-4,77.5C-5,62.3C-6; Arabinose: 93.3C-1, 76.2C-2, 66.2C-3, 70.2C-4, 62.7C-5;Rhamnose: 100.9C-1, 71.1C-2, 72.4C-3, 83.6C-4, 68.4C-5, 18.1C-6;Xylose: 106.4C-1, 75.2C-2, 84.4C-3, 70.2C-4, 66.6C-5; Apiose:110.9C-1, 77.5C-2, 80.2C-3, 74.9C-4, 65.0C-5)。该化合物数据与文献报道基本一致[。故鉴定化合物3为桔梗皂苷D3,结构式如图4所示。

    4 化合物3结构式



    Compound 4白色粉末(甲醇)。1H-NMR600MHz,pyridine-d5δ0.983H,s,H-29, 1.133H,s,H-26, 1.143H,s,H-30, 1.333H,s,H-25, 1.563H,s,H-24,1.763H,s,H-27, 1.703H,br.s,CH3-Rha)及不饱和双键氢δ5.721H,br.s, H-12)。13C-NMR150MHz,pyridine-d5 δ44.4C-1, 69.7C-2, 83.7C-3, 42.9C-4, 47.7C-5, 18.1C-6, 33.3C-7, 40.2C-8, 47.8C-9, 37.0C-10, 24.1C-11, 123.2C-12, 144.4C-13, 42.3C-14, 36.0C-15, 74.1C-16, 49.6C-17, 41.3C-18, 47.1C-19, 32.2C-20, 36.2C-21, 31.0C-22, 65.2C-23, 15.1C-24, 17.7C-25, 17.4C-26, 27.3C-27, 176.0C-28, 33.3C-29, 24.8C-30

    13C-NMR data of sugars:Glucoseinner):105.9C-1,74.2C-2,88.7C-3,72.0C-4,77.8C-5,70.8C-6; Glucoseterminal: 105.4C-1,75.4C-2,78.8C-3,69.4C-4,78.3C-5,62.3C-6; Arabinose: 93.5C-1, 75.6C-2, 66.0C-3, 69.9C-4, 62.6C-5;Rhamnose: 101.2C-1, 71.7C-2, 72.7C-3, 83.0C-4, 68.6C-5, 18.4C-6;Xylose: 106.7C-1, 75.2C-2, 84.8C-3, 69.1C-4, 67.0C-5; Apiose:111.3C-1, 77.9C-2, 80.5C-3, 75.3C-4, 65.4C-5)。该化合物数据与文献报道基本一致。故鉴定化合物4为远志皂苷D2,结构式如图2所示。

    图5 化合物4结构式


    3 小结

    采用75 %乙醇回流提取,再分别用石油醚、乙酸乙酯进行萃取,剩余水溶液浓缩后通过D101大孔吸附树脂,对60 %乙醇洗脱液进行提取分离。通过采用反复硅胶柱色谱法、ODS柱色谱和制备以及半制备高效液相色谱法等分离纯化手段,共分离纯化得到4个化合物,均为桔梗皂苷类化合物,鉴定为:去芹糖桔梗皂苷EDeapio-platycoside E)、桔梗皂苷EPlatycoside E)、桔梗皂苷D3Platycodin D3)和远志皂苷D2Polygalacin D2)。

    桔梗中主要药理活性成分为桔梗皂苷,含量较大,利用传统的萃取技术来纯化大量皂苷震摇剧烈容易产生乳化现象,不利于纯化,因此先使用大孔吸附树脂对皂苷成分进行前期纯化,有助于富集大量的皂苷进行后续的单体化合物的分离。

    桔梗皂苷为齐墩果酸型五环三萜类皂苷,一般母核连有3~7个糖基,极性较大,而且结构相近较难分离,采用硅胶柱层析等正相分离手段无法较好的分离,必须较多的借助反复ODS柱色谱,制备高效液相色谱等反相分离技术得以分离得到较纯的单体化合物。





    +关注 私聊
  • yy_0324

    第1楼2023/11/08

    深入了解桔梗的化学成分。

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    +关注 私聊
  • xiahuanihao

    第2楼2023/11/09

    充分了解桔梗!

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