APC色谱峰形异常，色谱柱清洗再生

应助达人

反冲再生色谱柱是一种常见的方法，用于恢复色谱柱的性能。以下是一些常用的方法和步骤：
1.?清洗：
先用乙腈低流速（0.2 mL/min）冲洗一夜，进样分析；如果效果不佳，再用异丙醇低流速（0.2 mL/min）冲洗一夜。异丙醇黏度较大，柱压会稍高。
2.?再生：
使用20~30倍柱体积的溶剂进行再生，低流速冲洗。具体步骤如下：
1.?10%甲醇；
2.?乙腈；
3.?异丙醇；
4.?乙腈；
5.?10%甲醇，各冲4小时，共计20小时。异丙醇是良好的过渡溶剂。
3.?反接低流速冲洗：
将色谱柱反接，用乙腈以0.15 mL/min 冲洗6小时。再生和反接时，未连接检测池，仅在液体出口处放了一个烧杯，以防止冲出来的污染物污染检测池。
4.?反接使用：
如果上述方法仍无法恢复柱效，可以将柱子反接使用。反接是色谱柱报废前最后的尝试，反接后不可再正接使用。
5.?正向冲洗：
将 C18 柱正向连接到液相色谱系统中，用低比例的有机溶剂（如水或缓冲液）冲洗色谱柱，以平衡固定相和流动相。冲洗时间通常为 30-60 分钟，流速为正常分析流速的 2-3 倍。
6.?氢氧化钠清洗：
对于难以清洗的污染物，可以使用氢氧化钠溶液进行清洗。将 C18 柱反向连接到液相色谱系统中，用 0.1-0.5 M 的氢氧化钠溶液冲洗色谱柱，流速为正常分析流速的 2-3 倍。冲洗时间通常为 30-60 分钟，然后用高比例的有机溶剂冲洗色谱柱，以去除残留的氢氧化钠。
7.?高温烘烤：
将 C18 柱从液相色谱系统中取出，在 120-150℃下烘烤 2-4 小时，以去除吸附在固定相上的有机物和水分。
8.?反冲溶液：
准备反冲溶液，可以选择使用乙醇、乙腈或水与有机溶剂的混合物作为反冲溶液。通常的反冲条件是使用60%的有机溶剂浓度。
将反冲溶液连接到色谱柱上，通过空气压力或泵送的方式将溶液从色谱柱的入口注入。
在反冲溶液注入结束后，尽量避免让液相柱干燥，可以通过将柱顶盖上或用保湿剂保护。
保持一段时间（一般需要30分钟到2小时），以充分洗脱色谱柱中已吸附的物质。
9.?干燥液相柱：
在重新开始使用液相柱之前，需要将色谱柱中的溶剂干燥，可以使用惰性气体（如氮气）进行干燥。
这些方法和步骤可以帮助你有效地清洗和再生色谱柱，恢复其性能。