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【金秋计划】+同一个样品重复进样时，为什么峰面积会波动呢？

memory光阴

2024/09/11

液相色谱（LC）

导致这种结果的原因有很多：
如果样品稳定的话，首先排除仪器的故障，有气泡是最主要的一种，气泡的产生会导致进样之间体积的不规律变化。
如果样品之间的浓度相差很大，而进样2-3针后同一个峰的峰面积保持不变，那么可能是样品残留。
峰面积的减少也有可能是温度引起的，但是这个影响很小，小于2%。如果你把样品从冰箱里拿出来放到进样器里，它会慢慢的升温，体积就会变大。这样前后的进样体积就有差别了。
流速的随机变化也会导致峰面积变化。流速改变的另一个潜在原因是系统高压部位漏液了，这个应该很容易发现。
复杂样品中如果有肩峰（与目标峰局部分离），软件就很难判断基线在哪里。这时采用手动积分或者用强制基线自动积分将会改善积分的重现性。样品本身也会造成峰面积变化。在反相色谱中发现有些蛋白质在开始的梯度中不能完全洗脱，残留的会出现在接下来的空白梯度中。这些鬼峰只在特定的蛋白质和洗脱程序中出现。如果是这样，就要在分析样品后添加空白。另外，蛋白质会不可逆的黏附在有些柱子内，随着进样的增加，样品的峰面积会慢慢变大。

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