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液相色谱(LC)
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【金秋计划】+液相色谱峰保留时间延长,怎样解决??
memory光阴
2024/09/11
私聊
液相色谱(LC)
1、流速降低
检查并重新设置流速;检查泵是否有气泡;检查泵密封垫是否渗漏,以及单向阀和其它系统渗漏。
2、流动相组成改变
检查系统是否有漏液点;排除系统气泡;补足溶剂瓶;确保梯度系统比例正确;预混合流动相进行等梯度洗脱;流动相组成的问题。在反相色谱中,保留因子
k和流动相中有机相的比例是成指数关系的。通常,有机相变化1%,保留时间会变化5%-15%,一般是10%。pH变化0.1会导致保留时间变化10%,所以要准确的测量pH,并且要校正好pH计,在反相色谱中随着pH的增加,酸性化合物保留时间缩短,而碱性化合物延长;离子对试剂的浓度会影响离子型化合物组分的保留时间。带有和离子对试剂相反电荷的分析物的保留时间会缩短,带同样电荷的会延长。正相色谱的保留时间对流动相中的极性成分非常敏感,任何情况下水都是一个麻烦,使用半饱和水的非极性溶剂比如正己烷和二氯甲烷来避免这个问题。
3、键合相流失
对于常用硅胶型色谱柱,要保持流动相
pH2~8之间;对于极高pH(>10)或极低pH(<2)的工作,使用高稳定性固定相,聚合物或高稳定性固定相柱。
4、硅胶填料的活化位点
使用流动相改性剂
;流动相中加竞争碱;固定相用更高覆盖度的填充料。
5、温度降低
控制柱温。通常温度每变化
1℃保留时间变化1%-2%。一般情况下影响没有那么大,显然这种问题用柱温箱就可以避免。
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