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高效液相色谱技能篇|关于方法验证中常见几个概念的小知识（3）

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2024/09/12

液相色谱（LC）

我们今天接着说：检测限和定量限

检测限 (LOD) 系指样品中的分析物能够被检测到的，但不需要被准确定量的最低含量。它是一个指定分析物的含量是否超过或低于一个定值的限量实验，一般被定义为3 倍的 S/N。

定量限 (LOQ)是指样品中的分析物可被分析方法定量测定的最小浓度，此定量测定应该具有可接受的准确度和精确度，一般被定义为10 倍的 S/N。

01.检测限的计算方法

1）直观法
用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。主要是通过配制一系列已知浓度的样品来试验，直至能够明显观察到信号或色谱峰。2）信噪比法用于能显示基线噪声的分析方法，即将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算岀能被可靠地定量的被测物质的最低浓度或量。一般以信噪比为3︰1时相应浓度或注入仪器的量确定定量限。（一般会重复3次）但是噪声范围是人为选定的，所以检测限的结果值可能会稍微受到主观性的影响。
3）基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法按照LOD=3.3δ/S公式计算。式中LOD：检测限；δ：响应值的偏差；S：标准曲线的斜率。δ可以通过下列方法测得：①测定空白值的标准偏差；②标准曲线的剩余标准偏差或是截距的标准偏差。02.定量限的计算方法1）直观法用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。主要是通过配制一系列已知浓度的样品来试验，直至能够明显观察到信号或色谱峰。2）信噪比法用于能显示基线噪声的分析方法，即将已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，计算岀能被可靠地定量的被测物质的最低浓度或量。一般以信噪比为10︰1时相应浓度或注入仪器的量确定定量限。（一般会重复3次）但是噪声范围是人为选定的，所以检测限的结果值可能会稍微受到主观性的影响。
3）基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法按照LOQ=10δ/S公式计算。式中LOD：检测限；δ：响应值的偏差；S：标准曲线的斜率。 δ可以通过下列方法测得：①测定空白值的标准偏差；②标准曲线的剩余标准偏差或是截距的标准偏差。03.基于响应值标准偏差和标准曲线斜率法中δ的计算方法1）测定空白值的标准偏差

a.准备空白样品：准备多个空白样品，这些样品应该只包含溶剂和可能的辅料，但不包含待测物质。

b.测定响应值：使用您的分析仪器（如HPLC、UV-Vis光谱仪等）对每个空白样品进行测定，并记录响应值（如峰面积、吸光度等）。

c.假设得到了7个浓度（0.010、0.011、0.009、0.012、0.010、0.008、0.010），计算其响应值的平均值=0.01

d.计算每个响应值与平均值的偏差X₁

e.计算偏差的平方和X₂

f.计算标准偏差δ=

2）标准曲线的剩余标准偏差
a.选择浓度和响应值：选择一系列已知浓度的标准样品，并测定它们的响应值（如吸光度、峰面积等）。
b.进行线性回归分析：使用这些数据点进行线性回归分析，得到标准曲线方程 y=a+bx，其中 a是截距，b是斜率。
c.计算每个数据点的预测值：使用标准曲线方程，为每个已知浓度的样品计算预测的响应值。
d.计算残差、残差平方和
e.计算剩余标准偏差SE=

3）再代入LOD或者LOQ的公式中进行计算
在通则9101里面也有明确规定，通过上述计算方法获得的定量限数据须用含量相近的样品进行验证。应附测试图谱，说明测试过程和定量限结果，包括准确度和精密度验证数据。
（后续讲解......）

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