【讨论】材料样品帖图

做的效果真是不错！赞一个！
彩色的图是怎么得到的？我的激光扫下来就是黑白的啊？用了荧光？
还有蓝色的区域是不是offset值设定的问题啊？

激光共聚焦也可以实现彩色,但要看您的设备的配置,有没有可见光,因为激光是单色光,彩色有可能是后加的违彩色.
如果有可见光源就可以拍彩色的照片.详细情况可以到宝钢新采购的显微镜处看看,这个应该是配置了可见光源的!
东北大学的也配置了这个功能!

用了伪彩来反应扫描时Gain值. 蓝色是PMT已经饱和. 我常用这个.
个人认为, 如果采样分辨能力是256的话, 并不能表示采的图一定是256级灰度, 因为, 假如在设置最大值在125并没用上仪器的最大分辨, 那么整图的灰度级在0~125之间, 那么这张图的灰度阶为1/128, 而不是1/256,失去了灰度细节. 所以我常把需要的区域调整到150~220之间.
自认为这张图的特点在用的是20倍的物镜0.70数值孔径, 在光学分辨能力下充分采用高数码采样2096*2096.如果同样采用1024*1024, 只能说不是损失视野就是损失分辨率.因为样品太大才不得以用了20倍, 没想到效果不错.
该物镜分辨率=(0.31~0.51)0.4*500nm/0.7=285nm, 视野x轴=1*10^6nm*sqrt(2)/2=7.07*10^5nm
每线应该有7.07*10^5/285*2=4961个像素点达到充分数码采样,否则浪费.
彩图比较简单, 大家都知道白是红加绿加蓝, 只要用这三色分别作图然后加相应伪彩后叠加就行, 控制一下各色比例就会真实些R:G:B ~= 0.31:0.5:0.19 (在一定强度区间内). 可以定作一个方法以后方便使用.

请教leicafans：
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该物镜分辨率=(0.31~0.51)0.4*500nm/0.7=285nm, 视野x轴=1*10^6nm*sqrt(2)/2=7.07*10^5nm
每线应该有7.07*10^5/285*2=4961个像素点达到充分数码采样,否则浪费.
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你的物镜分辨率和视野计算公式哪里有参考？
我看到的一个计算物镜分辨率的公式为σ=0.61λ/NA ,其所用的为Biorad Radiance 2000 激光共聚焦显微镜。
作者参考了下面文献：
[1]Pawley JB. Handbook of biological confocal microscopy, 2nd edn. New York, USA:Plenum Press, 1999
[2]Manual of Biorad Radiance 2000 confocal laser scanning microscope, Biorad Radiance Company, 2001

σ=0.61λ/NA 是普通显微镜物镜最高分辨率, 不是共聚焦的, 共聚焦的系数不同. 在公式中取值0.4
扫描视野是显微镜, 也是共聚焦一大重要指标之一

继续忽悠,

讲讲定位, 通常共聚焦采用检流计作为偏转器件, 承担着线性, 高速, 高精度和迟滞性的重任, 如果光路短, 偏转角就大, 整个视场的线性就不好, 器件容易短寿, 摆速低, 通常采用减小视野降低指标的方法去弥补. 光路长则不存在这些问题, 但在一定偏转角内的定位精度就是一大考验, 不能把4096*4096中的第2048个点扫到2049上去吧. 光路更需要细心调校.不过, 反过来讲, 4096中偏差1.5总比2048中偏差1强.

同样是Galvo,检流计振镜系统, 它的组合方式不同引起不少争论, 大家不妨撇一眼:
单振镜(一个带另外一个), 光学质量好, Z轴分辨率高, 四角不暗, 图像旋转慢,惯量大,
双振镜(各自独立摆动) , 自由, 惯量小, 易控制, 四角暗, 视场Z轴分辨率低(又一个要缩小视野的原因)



来源: Jean Montagu, Two axis beam steering systems, TABS, SPIE Vol. 1920, proceedings reprint, pp.
162-173

希望大家共同讨论

现在我也能做到你这个水平了，呵呵

过段时间我会发表一篇有关共聚焦应用的论文的，呵呵
最近太忙，没有整理好。