供货周期: | 一周 |
品牌: | |
规格: | 40000U—200000U |
货号: | EN5001 |
CAS号: |
概述
该酶催化契合的双链DNA或RNA的5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接,还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口,但对单链DNA或RNA无连接作用。
应用
1.TA克隆。
2.粘性末端和平齐末端均可连接。
3.限制性酶切片段的克隆。
4.将linker或adapter连接到DN**段的平齐末端。
来源
E.coli重组表达。
活性单位定义(Cohesive End Unit)
1CEU指在20μl 1×T4 DNA连接酶反应缓冲液中,在16℃反应条件下,30min能使50%的经Hind III 消化的λDN**段[5 端浓度为0.12μM(300μg/ml)]连接所需的酶量。
质量控制
双链内切脱氧核糖核酸酶检测:50μl反应体系中,1μl酶和1μg pUC57,37℃孵育4h,0.8%琼脂糖凝胶检测。结果显示无切口或线性DNA存在,表明该产品通过此项测试。
内切及外切脱氧核糖核酸酶活性检测:20μl反应体系中,包含200ng双链的寡核苷酸,1 μl酶,37℃孵育4h,反应产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并成像分析实验结果。结果显示寡核苷酸没有降解,表明该产品通过此项测试。
DNA 末端完整性和克隆效率污染活性的检测:将200ng pUC57酶切片段混合物(pUC57/HindⅢ,pUC57/PstⅠ,pUC57/SmaⅠ),1μl酶,37℃孵育4h,转化后进行蓝白斑筛选。白斑比例低于3%时,产品合格。
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