产品详情
概述
TdT(末端脱氧核苷酸转移酶,Terminal deoxynucleotidyl transferase 是一种无需模板的DNA聚合酶,催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3 羟基端,带有突出、凹陷或平滑末端的单、双链DNA分子均可作为TdT 的底物。
应用
1.催化DNA的3 末端添加同聚物。
2.利用修饰碱基(如ddNTP,DIG-dUTP)标记DNA 3 末端。
3.dUTP 缺口末端标记(细胞凋亡的原位检测)。
来源
大肠杆菌细胞,含有编码牛胸腺末端脱氧核苷酸转移酶的基因。
活性单位定义
一个单位是指在37℃、60min内将1nmol脱氧核糖核酸掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。
贮存条件
100 mMpotassium acetate (PH 6.8), 2 mM 2-mercaptoethanol, 0.01%(v/v)Triton X-100 and 50%(v/v) glycerol, -20°C贮存。
5×ReactionBuffer
1 Mpotassium cacodylate,125 mM Tris, 0.05% (v/v) Triton X-100, 5 mMCoCl2(PH 7.2 25°C)。
反应条件
1×ReactionBuffer,37℃温育。
活性抑制
抑制剂:金属螯合剂、铵、氯化物、碘化物和磷酸盐离子。
失活:加入EDTA,或70℃加热10min。
注意
由于含有CoCl2,TdT反应缓冲液不能与下游应用兼容,需采用柱离心法或苯酚/氯仿抽提及乙醇沉淀方法纯化反应混合物,除去CoCl2。
质量控制
1.双链内切脱氧核糖核酸酶检测:50μl反应体系中,1μl酶和1μg pUC57,37℃孵育4h,0.8%琼脂糖凝胶检测。结果显示无切口或线性DNA存在,表明该产品通过此项测试。
2.内切及外切脱氧核糖核酸酶活性检测:20μl反应体系中,包含200ng双链的寡核苷酸,1μl酶,37℃孵育4h,反应产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并成像分析实验结果。结果显示寡核苷酸没有降解,表明该产品通过此项测试。
3.DNA 末端完整性和克隆效率污染活性的检测:将200ng pUC57酶切片段混合物(pUC57/HindⅢ,pUC57/PstⅠ,pUC57/SmaⅠ),1μl酶,37℃孵育40h,转化后进行蓝白斑筛选。白斑比例低于3%时,产品合格。