供货周期: | 一周 |
品牌: | |
规格: | 200U—1000U |
货号: | EN1004 |
CAS号: |
概述
Klenow Fragment是大肠杆菌DNA聚合酶I的大片段,具有5→3的DNA聚合酶活性和3’→5’外切酶校正活性,但失去了5→3外切核酸酶活性。
应用
1.DNA平端化,5’突出段补平。
2.随机引物探针的合成。
3.第二链cDNA合成。
4.Sanger方法DNA测序。
来源
从带有编码DNA聚合酶I基因的E.coli polA菌株中提取,并利用基因重组技术,使用E.coli表达和纯化Klenow Fragment。
活性单位定义
在37°C条件下,30min内能使10 nmol 的dNTP掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。
贮存条件
25mMTris-HCl (PH 7.4),0.1mMEDTA,1mMDTT, 50%甘油, -20℃贮存。
10×反应缓冲液
100mMTris-HCl(PH 7.9 25℃), 500mMNaCl ,100mMMgCl2 , 10mMDTT。反应时需要加入dNTP(不随酶提供)。
热失活
75°C20min。
活性抑制剂
金属离子螯合剂,无机焦磷酸盐(PPi),大剂量的无机磷酸盐(Pi)。
纯度
考马斯蓝染色SDS-PAGE检测纯度大于90%,并无核酸内切酶、外切酶及RNase污染。
应用
双链DNA 5’突出端(5’overhang)的补平
第一步:混合下面各种反应物:
DNA | 0.1-4μg |
10×反应缓冲液 | 2μl |
dNTP Mix(2.5mMeach) | 0.4μl |
Klenow Fragment | 0.5-1μl |
无核酸酶的去离子水 | 补至20μl |
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