供货周期: | 一周 |
品牌: | |
规格: | 10000U |
货号: | EN1003 |
CAS号: |
概述
Phi29 DNA聚合酶具有高效的DNA合成能力,同时具有3→5外切酶校读功能,还具有特殊的链置换和连续合成特性。
应用
1.恒温protein-primed DNA扩增。
2.利用随机引物扩增DNA。
3.滚环复制。
4.复制extended-region。
来源
从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶,利用基因重组技术,使用大肠杆菌表达和纯化Phi29 DNA聚合酶。
活性单位定义
在30°C条件下,30min内能使25 pmol 的dNTP掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。
贮存条件
50mMTris-HCl pH7.5,100mMKCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,0.5%NP40, 0.5% Tween 20 ,50% glycerol;-20℃贮存。
10×反应缓冲液
400mMTris-HCl(pH 7.5), 500mMKCl ,100mMMgCl2 , 50mM(NH4)2SO4,40mMDTT。反应时需要加入dNTP(不随酶提供)。
热失活
65°C20min。
纯度
考马斯蓝染色SDS-PAGE检测纯度大于90%,并无内切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。
应用
滚环复制方法:
第一步:样品(菌液或质粒)准备:
1.菌液准备:挑取琼脂板上的菌落(尽量避免挑取到培养基)移至10 μl 的ddH2O中,混匀。
2.质粒准备:扩增已纯化的环状质粒,稀释至10 μg/ml。
第二步:混合样品和其他反应物:
样 品 | 2.5μl |
10×反应缓冲液 | 5μl |
125μM随机引物 | 10μl |
dNTP(each 25mM) | 1μl |
无核酸酶的去离子水 | 补至50μl |
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