Phi29 DNA Polymerase

Phi29 DNA Polymerase

参考价:¥1600
供货周期: 一周
品牌:
规格: 10000U
货号: EN1003
CAS号:
深圳华因康基因科技有限公司
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产品详情

概述
    Phi29 DNA聚合酶具有高效的DNA合成能力,同时具有3→5外切酶校读功能,还具有特殊的链置换和连续合成特性。
 
应用
    1.恒温protein-primed DNA扩增。
    2.利用随机引物扩增DNA。
    3.滚环复制。
    4.复制extended-region。
 
来源
    从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶,利用基因重组技术,使用大肠杆菌表达和纯化Phi29 DNA聚合酶。
 
活性单位定义
    在30°C条件下,30min内能使25 pmol 的dNTP掺入酸不溶性物所需要的酶量定义为1个活性单位。
 
贮存条件
       50mMTris-HCl pH7.5,100mMKCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,0.5%NP40, 0.5% Tween 20 ,50% glycerol;-20℃贮存。
 
10×反应缓冲液
        400mMTris-HCl(pH 7.5), 500mMKCl ,100mMMgCl2 , 50mM(NH4)2SO4,40mMDTT。反应时需要加入dNTP(不随酶提供)。
 
热失活
        65°C20min。
 
纯度
        考马斯蓝染色SDS-PAGE检测纯度大于90%,并无内切脱氧核糖核酸酶、RNase污染。
 
应用
        滚环复制方法:
        第一步:样品(菌液或质粒)准备:

        1.菌液准备:挑取琼脂板上的菌落(尽量避免挑取到培养基)移至10 μl 的ddH2O中,混匀。
        2.质粒准备:扩增已纯化的环状质粒,稀释至10 μg/ml。

        第二步:混合样品和其他反应物:


样    品 2.5μl
10×反应缓冲液 5μl
125μM随机引物 10μl
dNTP(each 25mM) 1μl
无核酸酶的去离子水  补至50μl
       第三步:90℃变性5min,立即置于冰上冷却。
       第四步:加入Phi29 DNA Polymerase 0.2-1μl。
       第五步:扩增反应:30℃,反应16h。
       第六步:失活反应:65℃,反应20min。
       第七步:检测扩增效果:选用酶切位点唯一的内切酶进行酶解反应,再用琼脂糖凝胶电泳检测扩增效果。

    

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