Taq DNA Polymerase

Taq DNA Polymerase

参考价：¥350
供货周期： 一周
品牌：
规格： 500U
货号： EN1002
CAS号：
深圳华因康基因科技有限公司
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产品详情

概述
    TaqDNA Polymerase是一种热稳定的DNA聚合酶，来源于嗜热细菌Thermus aquaticus。该酶具有5′-3′DNA聚合酶活性，还具有较低的5′-3′ 核酸外切酶活性，没有3′-5′的外切酶活性，在PCR产物的3′ 末端会加一个“A”，可用于TA克隆。
 
应用 
   1.常规PCR扩增反应，可扩增长达6kb的DN**段，通常适合扩增长度3kb以下的片段。   
   2.平端PCR产物3′ 末端加“A”。    
   3.DNA测序。     
   4.DNA3′ 末端标记。

来源
   来源于Thermus aquaticusYT1的TaqDNA Polymerase基因的重组E. coli菌株。
 
活性单位定义
    1单位（U）TaqDNA Polymerase活力定义为在72℃条件下，30min内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，催化掺入10nmol 脱氧核苷酸成为酸不溶性物质所需的酶量。
 
贮存条件
    20 mMTris-HCl (pH8.0)，100 mMKCl，0.1 mMEDTA，0.1 % NP-40 (v/v)，0.1 % Tween-20 (v/v)，1 mMDTT，50 %甘油（v/v），-20°C贮存。

10×TaqBuffer（with Mg2+）
     100 mM Tris-HCl (PH 8.8)
     500 mMKCl
     15 mMMgCl2
     1% Triton X-100

常规PCR反应条件
     一.室温融化反应所需溶液后混匀并短暂离心至管底，连同TaqDNA聚合酶一起置于冰上。
     二.按如下PCR反应体系（50μl）混合各溶液：

 

Template DNA ×μl
ForwardPrimer（10 μM） 1 μl
ReversePrimer（10 μM） 1 μl
dNTP Mixture（10 mMeach） 1 μl
10×Taq Buffer（with Mg2+） 5 μl
TaqDNA Polymerase（5U/μl） 0.25 μl
灭菌ddH2O up to 50 μl
                       注①：50μl PCR反应体系中模板DNA推荐使用量：
人类基因组DNA 50~500ng
大肠杆菌基因组DNA 5~50ng
λDNA 0.5~10ng
质粒DNA 0.1~5ng
                        ②：可以使用不含Mg2+的反应buffer,并根据需要自行添加MgCl2达到Mg2+ 的最适反应浓度。
      三.轻轻混匀反应液并短暂离心至管底，如果PCR仪没有热盖可加入一半体积的矿物油。 
      四.将PCR管放入PCR仪中，设置并运行PCR反应条件如下：
步骤 温度 时间 循环次数
预变性 94℃ 3~5min 1
变性 94℃ 30s 25~35
退火 Tm-5℃ 30s
延伸 72℃ 1min/kb
最后延伸 72℃ 5~15min 1
           注：PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异，在具体操作中需要根据模板类型、目的片段大小、扩增片段的碱基序列和引物的GC含量及长短等具体情况来设计最佳的反应条件，包括退火温度，延伸时间等。
 
质量控制
    纯度检测：经SDS-PAGE检测纯度大于95%。
    核酸内切酶检测：10U Taq DNA聚合酶与500ng λDNA在1×Taq buffer中37℃共同孵育16h，0.8%琼脂糖电泳检测，DNA没有出现降解和被切断表示通过该项检测。
    核酸外切酶检测：10U Taq DNA聚合酶与200ng 50 bp ssDNA在1×Taq buffer中37℃共同孵育16h，15%变性PAGE胶电泳检测，DNA没有出现降解，表示通过该项检测。
    大肠杆菌DNA污染检测：
     PCR 产物：544 bp
     Forward primer：5-GGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGAC-3
     Reverse primer：5-AGCCCGGGGATTTCACATCTGACTTA-3
     PCR程序：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
     0.8%琼脂糖电泳检测没有544bp产物出现，表明通过该项检测。
     质粒污染检测：
     T7 Promoter Primer：5’-TAATACGACTCACTATAGGGAGA-3
     T7 terminator Primer：5’-TATGCTAGTTATTGCTCAG-3
     PCR程序：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
     0.8%琼脂糖电泳检测没有PCR产物条带出现，表明通过该项检测。
    支原体污染检测：
     PCR产物:：717 bp
     GPO-1 ：5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAGTA-3
     MGSO ：5’-TGCACCATCTGTCACTCTGTTAACCTC-3
     PCR程序:：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
      0.8%琼脂糖电泳检测没有PCR产物条带出现，表明通过该项检测。

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