【求助】更换流动相出现了大问题！求助！

平衡的时间够长吗？

在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸 (TFA) 作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。三氟乙酸与多肽上的正电荷及极性基团相结合以减少极性保留，并把多肽带回到疏水的反相表面。以同样的方式，三氟乙酸屏蔽了固定相上残留的极性表面。三氟乙酸的行为可以理解为它滞留在反相固定相的表面，同时与多肽及柱床作用，这已在 Vydac Advances for Spring, 1997 中得到了报导 。

三氟乙酸优于其他离子修饰剂的原因是它容易挥发，可以方便地从制备样品中除去。另一方面，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于 200nm ，对多肽在低波长处的检测干扰很小。

改变三氟乙酸的浓度，可以细微地调整多肽在反相色谱上的选择性。这一影响对于优化分离条件、增大复杂色谱分析（如多肽的指纹图谱）的信息量是非常有益的。

三氟乙酸添加在流动相中的浓度一般为 0.1% ，在这个浓度下，大部分的反相色谱柱都可以产生良好的峰形，当三氟乙酸浓度大大低于这个水平时，峰的展宽和拖尾就变得十分明显。

PH值发生变化。。。。多冲一段时间就可以了

估计需要多走流动相一段时间。

应该是平衡时间不够，以前遇到这们的问题，也可以用不带盐的过渡流动相多冲洗一会，象你这种流动相只是酸变了，多走一段时间应该会变好，不行就洗会柱子就没问题了。

多冲洗一段时间应该可以了

谢谢你的指点，我把情况说具体点：
我的柱子是岛津VP-ODS，150*2mm，分析藻毒素，出问题后我先后用已丙醇、90%水，90%乙腈各冲过半小时，还用我分析条件的基线方法（加了0.05%TFA的水：加了0.05%TFA的乙腈=7：3，流速0.2ml/min）走了一两个小时，情况还是没改善。
你说的平衡是用基线方法呢还是用另外的什么溶剂进行冲洗？时间要多久才够？
请赐教，谢谢！

平衡基线用你使用的分析条件来平衡，包括相同的流动相、柱温、流速等。
一般有缓冲盐的情况平衡会时间比较长的，一般切换流动相至少要20倍以上。
就用你分析的条件走，直到基线稳定应该就可以了。
除非是别的原因。。。

我昨晚冲了一晚上了，谱图还是没恢复，出峰时间退后了十几分钟，还出现肩峰、杂峰！柱子应该没问题啊，我只用这根柱子测过藻毒素，发生问题明显是改用甲酸之后才出现的，我确定就是因为TFA改为甲酸，再改为TFA，柱子内部就发生变化了，但应该是可恢复的啊！别吓我啊！这根柱只用过两个月啊！！

我昨晚冲了一晚上了，谱图还是没恢复，出峰时间退后了十几分钟，还出现肩峰、杂峰！柱子应该没问题啊，我只用这根柱子测过藻毒素，发生问题明显是改用甲酸之后才出现的，我确定就是因为TFA改为甲酸，再改为TFA，柱子内部就发生变化了，但应该是可恢复的啊！别吓我啊！这根柱只用过两个月啊！！