【求助】在不同的紫外吸收波长处，主峰和杂质峰分离效果不一样，请问应该怎样确定波长？是选分离好一些的做波长吗？

应助达人

在不同的紫外吸收波长处，主峰和杂质峰分离效果不一样?应有如下几种情况：1、主峰的保留时间一样，杂质峰的时间不一样导致分离度不同，那说明很可能这个杂质并不是其它波长下检测到的同一个杂质。
2、主峰的保留时间不一致，那说明这个波长下对主成品无吸收，应更换波长，除非不做自身对照，而有杂质对照品时这个方法才可行。
所以最好对样品进行全波长扫描，确定主成品的最大吸收后再选择检测波长

最好的微调流动相的比例，让分离更彻底。波长对分离效果的影响如楼上所说。


浓度低的时候分离度总是很容易达到，你应该确定一下，平时所监控的样品杂质大小在什么程度，然后按最大的值和纯品在一起，确定这个情况下分离度达到要求。如果是长期做的样品，而且改杂质是比较重要的控制项，那就要更严格的使其分离更高一点。


如果你用的质量不太好的色谱柱，换一根不同批次的就很有可能需要重新调整流动相系统。这个是非常令人头疼的现象。所以，最好是做条件时给后面的不确定发生的情况留有余地。

要根据你的分析需要了.是用面积归一法计算,还是用内外标法计算.
如果只想考虑波长达到分离,当然是选择分得好的那个波长了.当然对分析结果不确定性.

只要系统条件不变，保留时间就不会变。正如上面所说，可能会是其他的杂质。主要看下2峰分离度怎么样，如果还可以的话，选用一个内标物吧。如果不好，最好再选另外一个较大吸收波长。

谢谢各位老师的解答，谢谢了！

做有关物质时要获得主峰与杂质的良好分离度和杂质能得到良好的体现为前提原则。