【分享】欧盟兽药检测方法（之三十六）

9.测定步骤
注意：所有操作步骤必须在暗处或避光操作。
9.1 肉样在韦林氏搀合器中混匀。
9.2 控制和空白样品：分别吸取0,100,200和500μL已稀释的标准液6.3.3于10g均质肉样中。
9.2.1 控制样品和空白样品以及 各10g混匀肉样品（试验样品）,在Stomacher（7.2.6）中用20mL水进一步均质3min。
9.3 转移这些材料到离心管中,在10℃、4000转/分钟离心5分钟。
9.4 用滤纸（7.2.7）进行过滤，滤液如介绍所述放于准备好的透析系统内。
9.5 透析—HPLC
根据以下步骤,标准工作液被注射到透析系统中,直到观察到一个稳定的基线和一致的峰高响应。
样品被放到自动进样器中,并且保持4℃。双样品剂量（2×370μL）导入到透析组件。2mL接受器溶液（水）由二级稀释器（DIL）吸取通过浓缩柱。完成透析以后，开启第二个六孔阀（Va.2）用水冲洗浓缩柱。已浓缩的样品用HPLC洗脱液（6.2.2）回洗至保护柱，再开启六通阀(Va.1)的泵洗至分析柱。被测物用UV检测器在320nm进行检测。
注意：该操作步骤（9.5）可用安装在232主机上的国产软件进行自动操作。

10. 计算结果
10.1 肉样中含量由下式得出：
含量（肉中）（mg/kg）= Hm/Hst ×Cst ×f
式中： Hm -- 样品中被测物的峰高
Hst-- 加入到空白样品中标准品的峰高。
Cst-- 空白样品中标准品的浓度（mg/kg）
f -- 稀释因子
10.2 回收率
肉样的回收率是在溶于水的标准品基础上进行测定的。结果为：
浓度 回收率%
Μg/kg 2-OH-Metab Ronidazole Dimetridazole Furazolidone Furaltadon
5 82 91 90 109 84
10 89 90 92 99 85
20 94 93 93 96 76

10.3 根据欧盟93/256决议（按第五节）可疑的峰必须具有与标准品相同的保留时间。

11.特殊事例
12.方法注意点
硝基呋喃类药物遇光易分解,所有步骤应避光操作是十分必要的。

13.质量控制

14.检测报告

15.缩略语（略）
见手册12节附录Ⅰ中的缩写。

16.检验流程图
肉→水提取→透析→HPLC→计算结果