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【求助】请高手解答:如何改变条件使峰分开

液相色谱(LC)

  • 本人 最近做一种色素的分离
    昨天刚刚做了 液相
    如图 1甲醇:水=60:40 流速1ml/min
    2 甲醇:水=50:50 流速 0.5ml/min

    很明显 峰移开一部分
    但是 不明显
    我想 请诸位 帮我出出注意
    1 是 继续改变 比例 还是 改变 流速 还是 加其他 溶剂
    (本人 加过一次 乙腈 大概 水:甲醇:乙腈=60:30:10 效果比这个 好不到哪去 就是 又分出 几个小峰、)

    亦或者 加些缓冲液??

    2 本人 用的是 氯仿:甲醇来 分离样品的
    经旋转蒸干后 用微量水 溶解进样的、
    我想请问 大家 那两个最高的峰 会不会是 溶剂峰呢?

    我有点迷惑 感觉不像 但有 不敢确定。
    非常感谢 大家!


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  • acesben

    第1楼2009/09/20

    图三是 甲醇:水=55:45

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  • wintersnowg

    第2楼2009/09/20

    用的什么柱子啊 多长的柱子 水相多点试试啊 用长柱子 会不会好点呢

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  • 有水有渝

    第3楼2009/09/20

    应助达人

    根据色素的性,改变一下PH,或用缓冲盐试试。

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  • acesben

    第4楼2009/09/20

    柱子 就一个 好像30cm的吧 反正柱子是不能换了
    其他的 我发现 增加水的比例 洗的峰 更多了。。

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  • acesben

    第5楼2009/09/20

    请 解释一下 ph与 缓冲盐的关系 谢谢

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  • zjw1985

    第7楼2009/09/21

    流速加大没试试吗?

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  • acesben

    第8楼2009/09/21

    流速大了 更分不开啊

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  • 〓猪哥哥〓

    第10楼2009/09/21

    一个是调节PH, 一个是更换柱子的类型试试看。

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  • looye2006

    第11楼2009/09/21

    1、你的色素 是有机还是无机物,用氯仿提取,又用水溶解?!!!想想清楚原理。
    2、前面是不是溶剂峰,你做一针空白不就知道了?!
    3、通常C18,反相色谱的话,溶剂峰处有倒峰的,水负峰。
    4、有DAD的话,你看一下光谱图。
    5、看一下你的两个峰,峰谷比,你很难分开,走一下梯度洗脱。参考:
    梯度条件
    流动相
    时间(min)
    A% B%
    曲线
    0 25 75 线性
    10.0 25 75 线性
    25.0 0 100 线性
    32.0 0 100 线性
    35.0 25 75 线性
    40.0 25 75 线性
    6、加一下酸或缓冲盐。0.1%甲酸,三乙胺,0.1%磷酸等。
    首先建议,你搞清色素的性质,然后找一种类似的分析物的分析方法,再优化条件。

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