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【求助】急求助液相鬼峰问题,试了一个星期了,还是没解决

  • xubingyong
    2009/12/01
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 各位HPLC站友:
    你好!
    我在做一个中药指纹图谱的过程中,碰到了许多鬼峰,请大家都帮我分析与出出主意,谢谢先,我的问题是:
    我在做指纹图谱过程中,采用的流动相是乙腈和水,梯度条件为:
    0-10min:2%乙腈,10-20min:2%-18%乙腈;20-25min:18%-35%乙腈;25-35min:35%乙腈;35-55min:35%-75%乙腈;55-60min:75%-100%乙腈;60-90min:100%乙腈;90.01-120min:2%乙腈。波长为203nm,柱温35度,进样量:20ul。色谱柱为AlltimaC18柱(250×4.6mm,5um)
    现在我在进一针蒸馏水,采用上述色谱条件进行分析,结果每次在25-30min位置会出现许多分离度很好的6到7个鬼峰(如09112301.D).
    首先,我要说明的是:
    1 我的方法是别人给的,别人已经做出来进蒸馏水是基本没有峰出现的,所以方法是绝对没问题的。
    2 我采用的色谱柱是新买的,而且在别的项目组的安捷伦1100上用过,也是没问题的,而且它们的流动相跟我们是完全一样的。但我们用它在我们这边三台安捷伦1100做都会在相同的位置出现几乎一样的鬼峰,现在基本上确定是我们的三台仪器长期维护不当而都产生了污染了,因为用我们的仪器做别的波长也不会有问题,所以也可以确定这种污染物在很低的波长下(203nm)有较强的干扰。
    后面打听我有别的项目组以前也出现过类似的鬼峰,它们是不断的用甲醇-乙腈-异丙醇-乙腈-甲醇循环冲洗系统一天,后面鬼峰面积会越来越小,直到没有。所以我也就按照它们的方法冲洗了整个系统2天,别外,根据安捷伦工程师建议在这之前还用5%硝酸冲洗过系统(没接柱子),结果不但问题没有得到解决,反而出现新的问题了,我们现在采用原有的色谱条件进蒸馏水时,它会在约15min位置基线明显成线性往上升,成台阶状,而且后面的基线也不会下来,总在200mAU高度水平(如图09112906.D)。
    请大家给我出出主意,现在我该如何清洗这个系统,我觉的我冲洗的够长的时间了,都快一个星期了,难道还没干净吗?另外,为什么我采用上述冲洗方法会出现15min位置基线明显成线性往上升的情况,而且后面基线都偏离0水平线较高的位置波动?
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  • 有水有渝

    第1楼2009/12/01

    应助达人

    不接色谱柱,用两通,用水和异丙醇冲洗一下系统,用水时的流速可以为2ml/min一小时,再用异丙醇1ml/min一小时,再用水,最后用乙腈冲洗到203波长下基线平衡后再试试

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  • yankunsu

    第2楼2009/12/01

    是不是水的问题?进样有没有问题?进样口是否污染

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  • xubingyong

    第3楼2009/12/02

    乙腈是默克的,天地的,水用过娃哈哈,乐百氏,屈臣氏等各种水都用过了,都是老样子,肯定不是流动相问题,当初我也以为是水的问题,现在别人用我们完全一样的流动相和柱子做却没问题,现在确定肯定是仪器不干净造成的啊 ,但就是不知用什么方法能解决这个问题,至于波长肯定是这个,因为皂苷的含测都是用203nm的波长的啊,别人也是这个方法流动相跟我的一样却做出来了,所以更加肯定是仪器的原因了

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  • cattle86

    第4楼2009/12/02

    看哈是不是进样器或者是色谱柱的问题啊?看哈进样口样品是不是不容易洗脱啊!慢慢排除嘛!要排除进样器的话,去借一台别个做这样品没问题的进样器来做做看撒!要排除色谱柱的话就用你做样的柱子上到别人没出问题的液相系统上去做看看!我感觉这样可以慢慢排除到底是那个部位出问题哈!

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  • 〓猪哥哥〓

    第5楼2009/12/02

    用异丙醇冲洗下仪器。时间可以长点。

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  • agirl

    第6楼2009/12/02

    受教,我也遇到相同问题

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  • racemehero

    第7楼2009/12/03

    我遇到过类似的问题,结果是把进样阀拆开清洗,并且更换进样阀垫片解决的

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  • li_20080114

    第8楼2009/12/03

    用10%的异丙醇冲洗系统12个小时,然后再用纯水冲洗干净直到基线平行

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  • ballooning

    第9楼2009/12/03

    可能进样位置有残留,不知道检测器是否彻底清洗过,看你前面的基线还很平,貌似不是检测器的问题,是不是以前做过的东西在仪器里有残留啊?

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  • dony2008

    第10楼2009/12/05

    可能污染物积累在柱头,化合物复杂,隔一会冲出一些。用纯甲醇或乙腈冲一下试试。

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