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【求助】分子量分布测试，老问题，不能理解，大家帮忙一下

flying_23

2010/06/12

液相色谱（LC）

测试的样品为生物反应器的上清液，成分很多，主要为蛋白质，多糖以及腐植酸，主要想看上清液的分子量分布
在文献中查到
UV detector of the GPC mainly targeted to protein detection in SMP and refractive index detector of the GPC mainly targeted to polysaccharide detection in SMP。
其中SMP的定义就为上清液
因此试验采用若用示差检测器的话，测得是糖的分布；用紫外检测器，测得是蛋白质分布

/////////////////////////////
在昨天的发帖中“采用液相色谱测定分子量分布时，遇到的问题”

有个回帖提到采用液相色谱做分子量分布，应该用示差检测器........，
还有个回帖提到蛋白质UV有吸收，糖UV没有吸收？
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实在不明白了，关系到论文的内容，请大家帮忙，到底该怎么测分子量分布，试验室就紫外和示差两种检测器

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caoxianfeng

第1楼2010/06/12

其实楼主可以两种检测器都试一下，看看哪个检测器检测结果更合理。实验实验，实验结果不是最能说明问题吗？据我所知，糖UV没有吸收，但是我没测过，你可以在紫外光谱仪上先测一下吸收。示差检测器是通用型检测器，只是灵敏度较低；紫外检测器灵敏度高，但对于没有紫外吸收的物质无能为力。

0

tigertooth

第2楼2010/06/12

蛋白质应该是UV和RI都有信号，多糖一般RI有信号UV无信号。但你要确定你的多糖到底是普通的多糖还是糖蛋白，因为我遇到很多人，把糖蛋白当成多糖，糖蛋白也是UV和RI都有信号的。

0

小不董

第3楼2010/06/12

应助达人

你需要测定分子量分布，用GPC是对的，关键在于选择合适的柱子，最好你要知道你的样品的分子量在什么范围。用水性柱还是有机相柱子。
蛋白质容易变性，其实不好做，用紫外检测器是很好的方法。多糖还是用IR比较好。有点想知道的是，你的GPC是在HPLC上做的还是什么？GPC上如果两种检测器都有，就比较好，但由于两者都是浓度检测器，很少人用这两个检测器联用的。
如果是两台仪器，那用同样的柱子和同样的流动相也可以做，一般IR有吸收，紫外没吸收的就是多糖，如果两个谱图可以放在一起，就比较好分别分析多糖和蛋白的分布了。

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