【讨论】关于基线不稳的问题

应助达人

楼主能不能把你的色谱条件说一下，流动相用的事先混合还是在线混合？

我觉得是你的柱子有点问题，这个可能是由你的样品造成的。如果你的样品里有极性非常弱的组分，且没有洗干净，可能会造成柱子平衡时间长。

常常会因为样品中的强保留物质造成基线波动。

首先，得看看柱压稳定不稳定？如果柱压不稳定或者偏高偏低的，就得排查原因。看看哪快出现问题了。
其次，柱压没什么明显变化，基线起伏与流动相流量、比例的稳定性之间的关系较大，所以当基线异常时，应先排查流动相的原因；其次温度不稳定也会造成基线起伏；另外，分析的样品通常不是完美的，总会有一些不被预期的强保留化合物存在，随分析时间的推移被缓慢洗出，也会使基线不规则地波动。解决办法就是流动相用之前要过膜，脱气。柱子要有柱温箱。室温要恒定。每次对用完的柱子要按照柱子使用说明书上来进行冲洗。

流动相用的是60：40的缓冲液和乙腈，缓冲液是0.9g磷酸二氢钠和4.8gN,N-二甲基辛胺用水溶解并定溶到1L，磷酸调PH=3.0，流动相事先混合好脱气的，脱了20-30min的气（Ps：这个流动相好像不太容易脱气，容易产生气泡）

我也感觉好像这柱子第一次分析这个样品像不适应似地出峰不正常，第二天就好多了，另外关于样品里的组分就不太明确了，不过你的解释还是很满意的，呵呵

嗯，解答得很详细全面，谢谢！呵呵，确实，出现那样的问题可能是你说的很多原因或者他们的结合导致的，我上面也说了，此流动相好像脱气不容易，开始的时候确实容易有气泡，从而导致泵压不稳，后来再重复脱气后泵压就稳下来了，我用的流动相用前是过膜了的，个人偏向比较怀疑流动相本身的问题，感觉这个比例混合似乎有点不合理，因为实践中有种混不匀的感觉，可是方法又是中国药典里的方法，另外看到美国药典里的方法居然跟这个方法完全不一样，不知道什么原因，疑惑中。。。

感觉应该是色谱柱的问题，对色谱柱进行冲洗。

流动相混合后，一定要溶解完全和充分澄清，再过滤。
这个流动相确实有点古怪，是测什么的？

嗯，因为缓冲液里含有较多缓冲盐等，60:40的比例中感觉乙腈比例偏高了，已经特别注意地把乙腈慢慢往缓冲液里加了，可是还是有种两相混不匀的感觉，样品是tamoxifen。