内标法方法开发

应助达人

如果单点内标法，先适当浓度配置A和B的混合物，进样测定到两者的峰面积，用峰面积和已知的含量计算校正因子，然后在待测样品中加入已知量的内标物，进样后，由内标物和目标物的峰面积和内标量及样品量计算出未知样品的含量。坛内有许多关于内标法的帖子，可以参考一下。

楼主可以先补一下内标法的基本理论知识
论坛内应该有的

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一、 内标法基础回顾（包括外标法的概念）
1. 定量响应值

不同的物质，由于其物理性质，化学性质（化学结构）的不同，在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱检测器[/url]（FID，TCD，FPD，ECD，MSD等）上的响应会不同。相同量的同种物质对不同检测器响应不同。相同量的不同物质对于同一种检测器响应不同。在质量选择检测器（MSD）上，物质的化学结构不同，电离电位不同，需要的电离能量不同，裂解碎片不同，裂解碎片丰度不同，这样得到的质量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p]离子色谱图[/url]的峰面积或峰高也不同（当然总离子色谱图的峰面积也不同）。直接用响应信号定量，必然导致较大误差。故引入响应因子或校正因子。定量响应因子或校正因子对检测器产生的信号加以校正，校正后的峰面积可以定量的代表物质的含量。例如图1中A, B, C三个化合物的有不同的含量和峰面积。

图 1

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2. 定量校正因子

校正因子是定量计算公式中的比例常数，其物理意义是单位面积所代表的被测组分的量。

可用下式表示：

绝对质量（或重量）校正因子 f’_i = m_i/A_i 可以导出 m_i = f’_i A_i

式中：m_i -----i组分的量；f’_i -----i组分的校正因子；A_i----i组分的峰面积

例如图1中A化合物的绝对质量校正因子 f’_A = m_A/A_A = 100/3000 = 0.033

(与组分性质、仪器灵敏度等有关，例如外标法采用绝对质量校正因子进行计算)

相对质量校正因子 f _{i/ s} = f’_i/f’_s = m_iA_s/(m_sA_i)

例如图1中，假如化合物B为基准物（或内标物），则相对于B，化合物A的相对校正因子是：

f _{A/ s} = 2500*100/(3000*80) = 1.04

响应值和校正因子的关系是互为倒数：即 S = 1/f 或 f =1//S 或Sf=1。

实际上一般多采用校正因子来进行定量计算。

注：安捷伦的仪器使用绝对响应因子（用RF表示）进行外标法定量，别的仪器是绝对校正因子。实际上安捷伦的RF就是一般的校正因子。

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3. 内标法

简单的讲，内标法就是在待测的样品中准确加入一定量的内标物，根据被测物和内标物的量及其在（在质谱中是质量色谱图）色谱图相应的峰面积比取出此被测定组分的含量。

样品中加入内标物，利用被测物与内标物校正因子的比值不变来进行定量的。

首先用被测物标准品和内标物配制标准溶液，求得定量响应因子或校正因子：

S _{i/ s} = S’ _i /S’_s = A_i m_s /（A_s m_i）

或 f _{i/ s} = f’_i/f’_s = m_iA_s/(m_sA_i)

请参考上面的相对响应值和相对校正因子的例子。

在样品中准确加入内标物后，再由它和样品的峰面积来计算：

m_i =（A_i /A_s ）*m _s / (S’ _i /S’_s)= （A_i /A_s ）*m _s /S _{i/ s}

(在安捷伦上是m_i =（A_i /A_s ）*m _s * RF‘_{i/ s}）

或 m_i =（A_i /A_s ）*m _s * f’_i/f’_s = （A_i /A_s ）*m _s * f _{i/ s}

例如，在含未知物A，C的样品中加入100ppm*的内标物B，进样后得到图2的色谱图：

（注：*例如，准确称取1.0000样品，加入1000ppm（即0.1%）的内标物化合物B标准液0.1000g，即在样品中的内标含量为: 1000ppm*0.1000/1.0000 = 100ppm）

图2

• 样品中不存在
• 化学性质与样品相似
• 与样品有相同的浓度范围
• 不会与样品发生反应
• 在感兴趣组分附近流出
• 可得到分离良好的、干净利落的峰*
• 色谱性质稳定
• 可迅速容易得到

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