可见——紫外分光光度法（UV）

七、UV法的误差
来源：化学因素；光学因素；仪器测量误差；操作误差等。
（一）化学因素
化学条件的选择，通过作A与化学条件的图谱（A-PH、Cn、t、T、……），选择曲线平坦且宽敞处对应的条件。
（二）光学因素：单色光纯度；杂散光；偏光
1.单色光纯度不好导致吸收曲线变形，使A-C曲线弯曲；
单色光的谱带宽度（狭缝宽度，nm）、S或△λ；
△λ大，光越不纯，当△λ合适时，所测A是最大的；
影响△λ的因素：光的强度，光越强，其值越大；空白的吸收越强，△A越大。
2.杂散光：单色器通道以外还存在的光占总光的比例
一般杂散光T%≤1%,《中国药典》用1%的NaI测220nm的T%，要求≤0.8%；用1%的NaNO2测340nm的T%，要求≤0.8%；
杂散光的误差有多大：△A≤0.434ρ（10A-1）ρ为杂散光的强度
△A=A理论-A测
影响：杂散光使A-C曲线向下弯曲，在末端吸收处可能会出现假峰或无峰或峰小。
250nm以下的杂散光主要为可见光；220nm以下的杂散光很大，不宜用于定量分析。△λ越大，杂散光越强。
3.背景干扰：溶剂、试剂等背景；浊度背景；荧光
消除方法：选择合适的空白溶剂、参比液；浑浊会使A增大，产生正误差，且不易稳定，可采用离心或过滤方法防止吸附使A下降，若浊度稳定，用双波长或三波长，导数光谱法测定；荧光背景使A减少，I无穷大于C，而A=lgI/I0=KC，可采用池远离检测器、池后放荧光片、改变溶剂或者降低浓度、增加A-C曲线的点数等方法来消除。
（三）仪器的测量误差
①A=0.1～1.0（一般应用）；A=0.2～0.7（对比法）；A=0.434，误差最小，因此一般A选择在0.3～0.7之内，0.5时误差最大。
②使A处于合适范围的方法
ⅰ改变池的厚度（比色法中）
ⅱ改变浓度（uv）
ⅲ改变测定波长
③样品测定A值在A～C曲线线性范围内或尽量在直线中点附近；用对比法测定时应使A样尽量接近A标。
④回归直线方程的表示方式
n=5～7
A=KC+b (r≥0.99（比色法） K、b的有效数字位数分别为：b=×. ××× K=×××；r≥0.999（uv） K、b的有效数字位数分别为：b=×. ×××× K=××××)。
（四）操作误差
①吸收池配对——空白进行基线校正，有池校正与光强校正之分，校正后可放大看到噪声大小，从而判断b、K的取值。
②吸收池的位置和方向。
③池的污染：手的污染；洗得不干净；擦得不好。
④样品的温度应与实验室一致。
⑤池内有气泡。
⑥波长在紫外区，或用挥发性较强的有机溶剂，池应加盖：防止挥发，防灰尘。
⑦光敏样品：测定完立即离开光路。
⑧光电管疲劳：连续使用小于5小时。
⑨波长校正：找出最大吸收波长是否符合要求。
（五）为确保分光光度定量的可靠性，须注意：
△溶液浓度无称量、体积和温度误差；
△被测定物完全溶解，最好以超声溶解；
△如有必要，混浊应过滤或离心，且防止吸附损失；
△不要出现池壁吸收（配对性），做基线校正；
△池壁干净，池面方向与光方向一致，池内壁无气泡；
△若对吸光度的准确度要求高时，应考虑单色光纯度（对光谱带宽或狭缝宽度进行校正）；
△参比液的操作过程应和样品液（对照液）完全相同；
△样品吸光度在合适范围内测量，优先考虑改变池厚度；
△在A大和波长小时，杂散光引起A减小，尤其空白吸收效明显时；
△对吸光度和波长的准确度经常检查，杂散光检查在规定范围内；
△应遵照厂家推荐的扫描参数和时间常数；
△仪器环境干净、干燥，无外界干扰（电子干扰、热变化及阳光等）；
△回归直线方程的正确表达。

数据处理很重要。