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峰前沿的厉害,一直解决不了,请各位指点一下

液相色谱(LC)

  • 完全按照国家药典标准检测“黄芩提取物”,但是出来的峰很不正常,

    如图所示

    采购的新设备,全部都是新的,柱子换过几根,柱温40℃,所有试剂均为HPLC级。

    请问要怎么才能解决这个问题,谢谢

      方法名称: 黄芩提取物-黄芩苷的测定-高效液相色谱

      应用范围: 本方法采用高效液相色谱法测定黄芩提取物中黄芩苷的含量。

      本方法适用于黄芩经加工制成的提取物。

      方法原理: 本品加甲醇溶解、稀释,摇匀,滤过,续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离,用紫外吸收检测器,于波长280nm处检测黄芩苷的吸收值,计算出其含量。

      试剂: 1.甲醇

      2. 磷酸

      仪器设备: 1 仪器

      1.1 高效液相色谱仪

      1.2 色谱柱

      十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。

      1.3 紫外吸收检测器

      2色谱条件

      2.1流动相:甲醇 水 磷酸 =47 53 0.2

      2.2检测波长:280nm

      2.3柱温:室温

      试样制备: 1. 称取供试品

      精密称定本品10mg,为供试品。

      2. 对照品溶液的制备

      精密称取黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含60mg的溶液。

      3.供试品溶液的制备

      取本品约10mg,精密称定,置25mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密量取5mL,置25mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,续滤液作为供试品溶液。

      操作步骤: 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL,注入高效液相色谱仪,用紫外吸收检测器于波长280nm处测定黄芩苷(C21H18O11)的峰面积,计算出其含量。

      参考文献: 中华人民共和国药典,国家药典委员会编,化学工业出版社,2005版,一部,p280。
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  • tangtang

    第2楼2012/02/25

    是不是有杂峰没有分开?

    上面贴的是中国药典2005年版的,2010年版的内容是一样的吧?

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  • ssskkk

    第3楼2012/02/25

    峰的拖尾因子0.72,不对称度0.42
    每次检测的主峰都是这个样子。

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  • tangtang

    第4楼2012/02/25

    对照品溶液也是这样的峰形吗?

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  • ssskkk

    第5楼2012/02/25

    这个就是对照品的峰,2005版和2010版内容是一样的

    检测样品时主峰也是这个造型

    tangtang(tangtang) 发表:是不是有杂峰没有分开?

    上面贴的是中国药典2005年版的,2010年版的内容是一样的吧?

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  • tangtang

    第6楼2012/02/25

    用的是手动进样器还是自动进样器?

    用50%甲醇溶解一点对照品试一下。或者就取1ml配好的对照品溶液,加1ml水,混匀后,进一针看看?

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  • ssskkk

    第7楼2012/02/25

    用的手动进样器,10ul定量环,每次注入40ul

    因为是完全按照药典检测,所以不能更改溶液的配置方法。

    现在柱子多买了好几根,再不解决问题,就要被炒鱿鱼啦

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  • tangtang

    第8楼2012/02/25

    我们遇到过使用手动进样器,溶剂效应明显一点。

    先确定原因,不是马上就改变。

    您如果点回复本贴,引用回复,就会发送提醒,更有利于讨论。

    ssskkk(ssskkk) 发表:用的手动进样器,10ul定量环,每次注入40ul

    因为是完全按照药典检测,所以不能更改溶液的配置方法。

    现在柱子多买了好几根,再不解决问题,就要被炒鱿鱼啦

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  • 老多_小多

    第9楼2012/02/25

    不管是药典还是标准,都只是推茬方法。看你的图,要么就降低泄度,要么就改溶剂甲醇水

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  • ssskkk

    第10楼2012/02/26

    好的,先按照您说的试试。

    tangtang(tangtang) 发表:我们遇到过使用手动进样器,溶剂效应明显一点。

    先确定原因,不是马上就改变。

    您如果点回复本贴,引用回复,就会发送提醒,更有利于讨论。

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