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流动相的改变影响含量?

液相色谱(LC)

  • 有一芳香酸和一芳香醛,HPLC分析过程中发现,流动相中有机相比例的改变得到的含量不一样
    有机相为乙腈和乙酸的水溶液
    附图,我觉得两个分离度都还可以,但是含量有差

    这是乙腈比例为45的图,两个主峰含量为22.33&77.49

    这是乙腈比例为40的图,两个主峰含量为20.19&79.67
    为啥含量会受流动相影响呢?
    请前辈们指导指导啊
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  • zhaohua8011

    第1楼2012/07/11

    有机相比例的不同,会影响洗脱能力,建议在相同的条件下进对照及样品!

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  • daisy3382

    第2楼2012/07/11

    那个芳香酸不溶于乙腈,我是事先用DMF溶了再用流动相稀释的,是不是进柱子后,洗脱不完全呢?
    在相同的条件下进对照及样品,意思是外标定量么?
    在同一个条件下做的含量是平行的

    zhaohua8011(zhaohua8011) 发表:有机相比例的不同,会影响洗脱能力,建议在相同的条件下进对照及样品!

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  • zhaohua8011

    第3楼2012/07/11

    洗脱能力影响极大,通常用外标定量即可!

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  • daisy3382

    第4楼2012/07/11

    好的,谢谢你,我是第一次发现在达到分离度的情况下,流动相比例的改变会影响含量的。
    之前做别的物质的HPLC方法的建立的时候也没发现有这个问题的存在。
    是不是不同的物质影响不一样啊?

    zhaohua8011(zhaohua8011) 发表:洗脱能力影响极大,通常用外标定量即可!

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  • 有水有渝

    第5楼2012/07/11

    应助达人

    归一法肯定受流动相调节的影响,往往保留时间越往后,峰面积越大,主要是峰展宽带来的影响。如果是用对照品法就可以消除这一系统误差。

    daisy3382(daisy3382) 发表:那个芳香酸不溶于乙腈,我是事先用DMF溶了再用流动相稀释的,是不是进柱子后,洗脱不完全呢?
    在相同的条件下进对照及样品,意思是外标定量么?
    在同一个条件下做的含量是平行的

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  • houjjun

    第6楼2012/07/11

    流动相比例不一样,他们出峰时间就会不一样,洗脱强度也会不一样,会导致他们的分离程度也就不一样,峰宽也不一样,所以峰面积肯定会不一样,含量必然也就不一样了。

    做实验时色谱条件是不能随意改变的,一旦改变了,这个样或这批样的结果多少会有变化。

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  • 1818

    第8楼2012/07/11

    没理由啊,如果是同样条件进对照和样品。含量应该一致才对

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  • daisy3382

    第9楼2012/07/11

    “同样条件进对照和样品。含量应该一致才对”啥意思?不是很明白。请指教
    我现在的问题是分析同一个混合样,流动相比例改变了,混合样中两者面积百分含量也会变?

    1818(xyhdcm2002) 发表:没理由啊,如果是同样条件进对照和样品。含量应该一致才对

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  • daisy3382

    第10楼2012/07/11

    之前分析过一个样品,流动相比例变了,出峰时间也变了,分离强度也不一样,但是归一化时面积含量百分比是不变的。
    这次做的样是变的,所以疑惑的。
    是不是不能一概而论,还是要看具体的分析物质的?

    houjjun(houjjun) 发表:流动相比例不一样,他们出峰时间就会不一样,洗脱强度也会不一样,会导致他们的分离程度也就不一样,峰宽也不一样,所以峰面积肯定会不一样,含量必然也就不一样了。

    做实验时色谱条件是不能随意改变的,一旦改变了,这个样或这批样的结果多少会有变化。

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  • 371147760

    第11楼2012/07/11

    不应该啊,我只做过单一的药物,改变流动相比例后药物峰高和峰面积会发生变化,但是峰面积不会发生变化,

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