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液质中空白样出峰?

液质联用(LCMS)

  •   我刚开始上手液质,没经验,请大家帮忙分析一下实验中遇到的问题。

      我用的是c18, RP, 100mm, 2.1um 的柱子,样品是steroids, 貌似很粘柱子。

      gradient用的是: 100H20+0.1%formic acid 99.9%MtOH+0.1% formic acid

      0 min: 60% 40%

      5 min: 0% 100%

      10min: 0% 100%

      15min: 60% 40%

      然后样品都是在6分多钟才洗出来,强度都还是挺稳定的。 但是,在接着样品之后,我把样品换成100%甲醇,然后一样的gradient, 跑了5次,居然每次都在6,7 分钟有峰出来,而且强度还很大,有的比我50ng/ml 的样品还高。

      换了进样针,还是一样的问题。我就一直用100%甲醇跑,想把柱子上可能残留的样品都洗完。我样品换成100%的甲醇,然后一直保持流动相为100%甲醇不变30分钟,但是奇怪的是,这样跑了好几次,每次都是一开始一两分钟内有个峰,强度在10的3次方左右,跟我的样品差不多了,然后后面就没峰了。但是如果洗干净了的话,为什么每次接下来还是一样有峰呢?

      大家会液质的同学,帮我看看吧,多谢多谢了!!
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  • happy爱米粒

    第1楼2012/08/23

    楼主的样品溶解液是什么比例?建议擦洗一下离子源

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  • chy57589893

    第2楼2012/08/24

    四点,1.首先你需要确定你的空白样品溶液是否受到了污染,我是说在你的前处理过程中的污染,因为你的空白样的面积比标液的都大,排除了是在进样过程中的污染。
    2.先用丰度比确认下空白样出的这个峰是不是被测组分,如果不是的话,就是干扰,就要想办法分离(更换色谱柱或者调整流动相)。
    3.建议你做空白试验,作下试剂的排除
    4.另外,如果怀疑是柱残留,也不能光是拿100%甲醇来冲洗就能洗脱的,需要进行梯度洗脱的。

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  • zhulityx

    第3楼2012/08/24

    楼主这种情况的话,有可能残留……残留可以在柱子、peek管、六通阀、液相进样针等地方发生,所以建议楼主一步步地排查……
    首先,很重要的一点,如楼上所说的,确定空白样品峰是否目标离子峰,如果不是,就要调流动相比例分开就行了。。
    1.排查色谱柱,将色谱柱移除,其它的条件不变,看看进样后再进几针空白是否还有你说的残留的情况,注意这个时候的出峰时间是很前的,如果有的话,继续排查……(进空白针的时候流动相比例不能变…………),如果没有残留了,楼主在洗柱子的时候可以尝试用其它的空白样品,但是流动相的比例以及分析时间最好不变……
    2.如果色谱柱不残留,接下来要考虑六通阀:把液相的管路不通过六通阀直接连接到质谱,再重复第一个步骤,还是有残留的话,冲洗peek管或者更换peek管,如果这样还有的话,建议楼主检查自己的流动相以及前处理是否带入污染…………

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  • lynch_xiaoyi

    第4楼2012/08/24

    空白样是目标峰阿,用的是SRM, 271-109,就用这个离子对是空白样的峰差不多是样品响应值得一半。换别的离子对空白样就没峰了。

    昨天百自动进样器的针座洗了,还是这种情况。这种会是柱子上的残留吗 ,如果柱子上有残留,为什么会是跟样品一个洗脱时间出来呢?

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  • 小猪飞飞

    第5楼2012/08/28

    271-109是什么物质?看看是不是六通阀的污染。柱子上如果有的话,一般是在柱头部分,建议以后做样时加上合适的预柱

    lynch_xiaoyi(lynch_xiaoyi) 发表:空白样是目标峰阿,用的是SRM, 271-109,就用这个离子对是空白样的峰差不多是样品响应值得一半。换别的离子对空白样就没峰了。

    昨天百自动进样器的针座洗了,还是这种情况。这种会是柱子上的残留吗 ,如果柱子上有残留,为什么会是跟样品一个洗脱时间出来呢?

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  • Insp_8d3058ba

    第6楼2019/10/05

    请问楼主问题解决了吗?我用AB6500做多肽定量的时候也遇到了类似问题,想向您请教一下
    微信15205157228

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  • liumanglao

    第7楼2020/06/18

    我前两天也碰到类似问题,结果发现是溶剂被待测物污染了

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  • Ins_795b3b60

    第8楼2023/07/14

    遇到同样的问题加一,是不是需要使用楼上大佬的方法排查一下?

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