三人行
第1楼2013/01/17
1.1主要仪器设备Agilent1100高效液相色谱仪,与G1315B二极管阵列检测器联用;紫外分光光度计(ShimadzuUV1601,日本岛津);电热恒温水浴锅(北京医疗器械厂);RE52CS旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
1.2 试剂与材料胭脂虫红(CASNo:139026524),购于Sigma-AldrichChemicalCorp1;甲醇,山东禹王有限公司,色谱纯;重蒸去离子水;硫酸和乙酸铵,广州化学试剂厂,分析纯;三正辛胺,东京化成工业株式会社,分析纯。
1.3 标准溶液配制准确称取胭脂虫红(其结构式见图1)对照品5010mg于100mL容量瓶中,用重蒸去离子水溶解定容,配成0150g/L的标准溶液储备液。
1.4 样品前处理取样品约20g,用水反复漂洗色素,合并洗液作为样品液;若样品为肉制品,先用绞碎机绞碎,加90mL无水石油醚分3次去除脂肪,再用热水分3次萃取色素,合并萃取液为样品液。样品溶液放入分液漏斗中,加2mL浓盐酸、10mL三正辛胺正丁醇溶液(体积分数5%),振摇提取,重复提取3次。合并有机相,浓缩至10mL,用10mL饱和硫酸钠溶液洗2次。转移至分液漏斗中,加50mL正己烷混匀,用2%(体积分数)的氨水提取3次,每次5mL,收集解吸液,加乙酸中和,减压蒸干(40℃以下),加水溶解定容至5mL,经滤膜(0145μm)过滤,取20μL进高效液相色谱仪。
1.5 色谱条件色谱柱:WelchMaterialsXB2C18(416mm×250mm,5μm);流速:110mL/min;进样量:20μL;流动相:0102mol/L乙酸铵和甲醇;梯度洗脱程序:甲醇20%~35%,0~5min;35%~98%,5~10min;98%,保持6min;柱温:25℃;定性确证波长:211、280、331和503nm;检测波长:280nm