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液相色谱之核心液相色谱柱检测

houjjun

2013/08/17
药物分析

私聊

液相色谱（LC）

Pgrandsil-STC-C18色谱柱检测报告

说明：由于业务需要，根据某色谱柱厂商要求，对其提供的色谱柱进行某些性能及技术指标的测试，并详细记录了实验现象及数据，通过计算总结给出检测报告。

实验报告部分

1.目的

1. 测试和评价某厂商提供的色谱柱是否合格

2.原理和依据

1. JJG705-2002液相色谱仪

2. GB/T26792-2011 GB/T22388-2008

3. 厂家色谱柱评价方法

4. 个人经验判断

3.测试内容

由于仅测试被测试色谱柱性能指标，因此仅关注如下指标

序号	测试科目	要求	检验目的
1	保留时间	3-10min	检测保留性
2	定性重复性	<0.5%	检测柱性能
3	定量重复性	2%	检测柱性能
4	柱效(理论塔板数N)	>1500	检测柱性能
5	拖尾因子	0.8-1.2	检测填料和键合是否流失
6	柱压	400-1500psi	检查有无堵塞或坍塌
7	不同条件测试	趋势与理论相符	检查保留能力

测试时将依据但不限于以上内容。

主要评价指标和计算方法如下：

1) 峰高(Height)：峰顶点至基线的距离；

2) 半峰宽(Half bandwidth)：1/2峰高处峰宽；

3) 理论塔板数：（Theoretical plates）：

；

4) 不对称因子(Asymmetry factor)：B/A （10％峰高处）；

4.材料的工具

4.1 仪器与设备

4.1.1 L600系列高效液相色谱仪系统：配有等度泵、柱温箱、紫外检测器、自动进样器

4.1.2 Pgrandsil-STC-C18色谱柱，4.6mm×150mm ,5um

4.1.3 Pgrandsil-STC-C18色谱柱，4.6mm×250mm ,5um

4.1.4 LCWin1.0色谱工作站

4.2试剂

4.2.1 苯：色谱纯；

4.2.2 甲苯：色谱纯；

4.2.3 萘：色谱纯；

4.2.4 甲醇：色谱纯

4.2.5 乙腈：色谱纯

4.2.6 超纯水；

4.3所用试剂的制备

4.3.1 甲醇水溶液：准确量取50 mL 甲醇和50 mL 水，混匀后备用。

4.3.2 苯、甲苯、萘混合标准溶液：准确称取萘、苯、甲苯、适量于100ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，配制成1.0mg/ml的标准品溶液（三种物质浓度均为1.0mg/ml），备用。

4.3.3 流动相：A:甲醇：水=（80:20）

B:乙腈：水=（70:30）

5.测试方法

HPLC 参考条件

a) 色谱柱：Pgrandsil-STC-C18色谱柱，4.6mm×150mm ,5um；

Pgrandsil-STC-C18色谱柱，4.6mm×250mm ,5um

b) 流动相：A:甲醇：水=（80:20）

B:乙腈：水=（70:30）

c) 流速：1.0 mL/min。

d) 柱温：35℃/室温。

e) 波长：254 nm。

f) 进样量：10 μL。

以下实验分别采用A、B两种流动相150mm、250mm长两种规格的色谱柱各测试一次，每次平行进3针。

6.测试结果

保留时间

根据5.1中方法检查，衡量标准参考3中内容，结果如下表：

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×250mm ,5um
序号	测试项目		测试结果	要求	结论
1	保留时间 Tr/min	A:甲醇：水=（80:20）	5.532	3-10	符合要求
			7.302
			8.823
2			5.533
			7.300
			8.820
3			5.533
			7.298
			8.815
4		B:乙腈：水=（70:30）	5.720
			7.360
			8.707
5			5.720
			7.360
			8.703
6			5.720
			7.362
			8.707

相关图片如下：

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×250mm ,5um（测试条件A）

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×250mm ,5um（测试条件B）

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×150mm ,5um
序号	测试项目		测试结果	要求	结论
1	保留时间 Tr/min	A:甲醇：水=（80:20）	3.277	3-10	符合要求
			4.373
			5.323
2			3.273
			4.368
			5.313
3			3.273
			4.367
			5.315
4		B:乙腈：水=（70:30）	3.385
			4.358
			5.210
5			3.383
			4.382
			5.207
6			3.382
			4.382
			5.203

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×150mm ,5um（测试条件A）

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×150mm ,5um（测试条件B）

从以上结果可以看出，测试结果符合要求

定性重复性

根据5.1中方法检查，衡量标准参考3中内容，结果如下表：

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×250mm ,5um
序号	测试项目		Tr/min	测试结果%		要求		结论
1	保留时间 Tr/min	A:甲醇：水=（80:20）	5.532	0.01	<0.5%		符合要求
			7.302
			8.823
2			5.533	0.03
			7.300
			8.820
3			5.533	0.05
			7.298
			8.815
4		B:乙腈：水=（70:30）	5.720	0
			7.360
			8.707
5			5.720	0.02
			7.360
			8.703
6			5.720	0.03
			7.362
			8.707

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×150mm ,5um
序号	测试项目		Tr/min	测试结果%		要求		结论
1	保留时间 Tr/min	A:甲醇：水=（80:20）	3.277	0.07	<0.5%		符合要求
			4.373
			5.323
2			3.273	0.07
			4.368
			5.313
3			3.273	0.10
			4.367
			5.315
4		B:乙腈：水=（70:30）	3.385	0.05
			4.385
			5.210
5			3.383	0.04
			4.382
			5.207
6			3.382	0.07
			4.382
			5.203

从以上结果可以看出，测试结果符合要求

定量重复性

根据5.1中方法检查，衡量标准参考3中内容，结果如下表：

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×250mm ,5um
序号	测试项目		Ar/μAu·s	测试结果		要求		结论
1	峰面积	A:甲醇：水=（80:20）	709994.570	0.6	<2.0%		符合要求
			892728.419
			1150719.050
2			713233.370	1.7
			872940.830
			1142995.690
3			704755.900	0.8
			863302.170
			1132972.809
4		B:乙腈：水=（70:30）	811983.311	0.5
			978670.751
			1115535.122
5			818088.089	1.3
			961304.701
			1131736.450
6			819056.756	0.7
			955370.559
			1127469.307

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×150mm ,5um
序号	测试项目		Ar/μAu·s	测试结果		要求		结论
1	峰面积	A:甲醇：水=（80:20）	542196.557	0.5	<2.0%		符合要求
			561915.219
			1113191.855
2			540825.040	0.8
			568998.379
			1103377.671
3			546466.790	0.5
			560362.449
			1112555.480
4		B:乙腈：水=（70:30）	586108.980	0.7
			620774.719
			1080190.156
5			582406.790	0.8
			618091.570
			1088031.929
6			578146.260	0.7
			611280.299
			1073222.379

从以上结果可以看出，测试结果符合要求。相关谱图同6.2。

柱效测试

根据5.1中方法检查，衡量标准参考3中内容，结果如下表：

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×250mm ,5um
序号	测试项目		测试结果	要求	结论
1	柱效	A:甲醇：水=（80:20）	22569	>1500	符合要求
			23687
			23665
2			21739
			24399
			24860
3			22583
			24388
			24831
4		B:乙腈：水=（70:30）	23230
			24802
			25500
5			23230
			24802
			24831
6			23230
			25582
			24850

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×150mm ,5um
序号	测试项目		测试结果	要求	结论
1	柱效	A:甲醇：水=（80:20）	10120	>1500	符合要求
			12164
			11871
2			11038
			12581
			12543
3			10099
			12571
			12184
4		B:乙腈：水=（70:30）	11804
			13151
			13640
5			11792
			13631
			13622
6			12335
			13631
			14047

从以上结果可以看出，测试结果符合要求。

拖尾因子

根据5.1中方法检查，衡量标准参考3中内容，结果如下表：

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×250mm ,5um
序号	测试项目		测试结果	要求	结论
1	脱尾因子	A:甲醇：水=（80:20）	1.137	0.8-1.2	符合要求
			1.071
			1.029
2			1.135
			1.081
			1.025
3			1.144
			1.025
			1.081
4		B:乙腈：水=（70:30）	1.094
			1.068
			1.062
5			1.094
			1.053
			1.018
6			1.094
			1.053
			1.031

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×150mm ,5um
序号	测试项目		测试结果	要求	结论
1	脱尾因子	A:甲醇：水=（80:20）	1.105	0.8-1.2	符合要求
			1.131
			0.987
2			1.148
			1.125
			0.993
3			1.109
			1.136
			0.981
4		B:乙腈：水=（70:30）	1.102
			1.116
			1.007
5			1.105
			1.136
			1.007
6			1.116
			1.107
			1.007

从以上结果可以看出，测试结果符合要求。

柱压

根据以上方法检查，检测过程中柱压在400psi-1000psi之间，考虑柱长、流动相、温度和压力传感器等的偏差，属于正常范围。

压力波动约为3-5psi，符合要求。

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×250mm ,5um
序号	测试项目		柱压/psi[1]	要求	结论
1	压力波动	A:甲醇：水=（80:20）	853	400-1500	符合要求
2			856
3			852
4		B:乙腈：水=（70:30）	614	400-1500
5			610
6			615

Pgrandsil-STC-C18 色谱柱，4.6mm×150mm ,5um
序号	测试项目		柱压/psi[2]	要求	结论
1	压力波动	A:甲醇：水=（80:20）	729	400-1500	符合要求
2			725
3			724
4		B:乙腈：水=（70:30）	420	400-1500
5			423
6			420

不同条件下测试

所有测试结果再前面已经列出。

1. 当流动相（甲醇：水）变化时（由80:20变为85:15、90:10），柱压下降；

2. 当流动相（乙腈：水）变化时（由70:30变为80:20、90:10），柱压下降；

这些变化符合经验规律，因此判定此项指标正常。

7.测试结论

现将6中提到的测试结果总结如下：

序号	测试科目	要求	测试结论
1	保留时间	5-35min	+
2	定性重复性	<0.5%	++
3	定量重复性	2%	+
4	柱效(理论塔板数N)	>1500	++
5	拖尾因子	0.8-1.2	++
6	柱压	400-1500psi	+
7	不同条件测试	趋势与理论相符	+

图例：++表示优秀

+表示普通或符合要求，

-表示功能不符

结论：

1.根据实验检测的七项指标，结果显示三项优秀，四项符合要求；

2.该色谱柱作为高效液相色谱柱符合高效液相色谱柱的各项要求；

3.该色谱柱符合色谱柱说明书上介绍的各项性能及指标的要求；

4.该色谱柱能够满足高效液相分析所需C18色谱柱的要求；

5.根据以上实验过程及结果，Pgrandsil-STC-C18色谱柱性能较好，属于合格的色谱柱。

说明：此报告没重点测试分离度指标，但大家通过看谱图也应该能看到分离度的指标还是不错的。如果有对分离度指标有特殊要求的，可以根据以上实验方法对分离度做重点测试，包括采用同分异构体等性质特别接近的物质，采用梯度洗脱等特殊方式。这个就看要求的程度和现有的实验条件以及在同等条件下不同色谱柱测试效果的对比了。

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