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液相色谱法含量检测的注意事项

zhoujin83

2014/04/10

液相色谱（LC）

液相色谱法检测含量是液相分析工作的重要的一项，液相色谱法检测含量用的基本是外标法和内标法。其中外标法检测的准确性受到更多因素的影响，更需要丰富的经验来避免或减小误差。本人是做农药制剂分析出身，经过多年的锻炼，自认为对外标法含量检测小有心得，加之最近论坛有坛友问及相关问题，所以想写一篇这方面的小文章，以供大家参考，同时也希望大家补漏拾遗，如有不对的地方，也请指出。

首先，我们来看看外标法含量检测的计算公式：

含量=m对*P*A样*V样/（m样*A对*V对）*100%

其中的各个符号的意义大家都知道，我就不赘述。这其中的任何一项发生了改变，都会使得检测结果发生变化，而这其中的任何一项，都有很多种原因使其发生变化。下面我们就逐一分析。

1. m对/m样——对照品称样量/样品称样量

1.1 天平准确性天平是否经过校准，其是否在正常工作状态，称量时天平是否带有静电，是否有空气流动，这些都是影响读数的因素。

1.2 称量方式采用的是加量法还是减量法，都是很有讲究的。正常情况下，肯定要采用加量法，一次称取到位，这样才能得到准确的称样量。

1.3 称量操作称量时，是否足够小心，不会在转移样品时使样品撒漏，这个是非常重要的。

1.4 样品性质样品如果具有挥发性，直接称样时，必然会挥发一部分造成误差；另外，如果样品不稳定，或在溶液中不稳定，那么实际上来讲，也是影响了样品量。还有，样品要保证均匀，固体不必说，液体样品要保证是均相，称量之前要摇匀。

1.5 称样量对于万分之一天平，称样量最好能在100mg以上；对于十万分之一的天平，称样量应在10mg以上。

2. P——对照品含量

2.1 对照品质量对照品是否有合法来源，其含量值是否准确，这个相信大家都知道。

2.2 对照品的保存对照品是否按要求保存，也是至关重要的。因为如果对照品没有按照规定保存，那么其右可能会发生降解，进而影响含量值；另外，如果对照品是保存在冰箱中，称量时，应取出放在干燥器中回至室温再称量，否则其很有可能会吸收空气中的水分，影响含量值。同理，如果对照品引湿性很强的话，长期暴露在空气中，也会使其P发生变化。

3. A样/A对——样品峰面积/对照品峰面积

3.1 方法的可靠性如果所用的分析方法可靠性不好，样品峰面积或保留时间容易变化，那么检测结果也是很重现性不好的。关于方法的可靠性，做过分析方法验证的人应该都能明白，这里包括系统适用性、精密度、准确性和耐用性以及线性等。

3.2 仪器进样精密度这其实可以包括在上述3.1因素中。

3.3 残留或污染如果仪器系统被污染产生残留，而本身峰面积就不大的情况下，这个因素产生的误差就更明显了。

3.4 积分如果样品峰形不够好，或者分离度不够好的情况下，积分就很重要。

4. V样/V对——样品稀释体积/对照品稀释体积

4.1 容量瓶、移液管等体积是否准确一般来说，新买的容量瓶体积是符合要求的，但是也难免会买到个别次品，这就需要进行校验了。

4.2 容量瓶、移液管规格这个是很重要的，一般大家都能注意这个问题，做到合理使用。

4.3 容量瓶等使用习惯容量瓶在使用时，不能使其至于高于40摄氏度的环境下，否则容量瓶会发生变形。我们以前有个习惯，冬天尤其频繁——瓶子不够用了，而洗过的还没干，就用电吹风吹干，这种行为不光会影响体积，还会使容量瓶瓶口发生变化，摇匀时造成漏液现象。

4.4 定量操作这个包括容量瓶和移液管的使用，正确的使用方法就不用说了吧。我只说一些注意事项，一是移液管吸液时，液面不要高刻度太多，放液时千万不要用洗耳球吹，并且尽量保持每次操作时间都一样，粘度大的溶液尤其需要如此。二是观察液面时，要使容量瓶和移液管保持垂直，这时很多人喜欢用三根手指捏住，其实这样不容易保持垂直，最好用两根手指，轻轻捏住就好。三是注意接触容量瓶移液管等的面积越小越好，以免体温加热溶液。

4.5 温度 a）如果对照品和样品没有用同一份稀释剂稀释的话，两者就会有差异，受到温度变化的影响也是不一样的。比如，所用的稀释剂为水：甲醇=50：50，对照溶液用的是上次配好的，然后样品用的是新配的，因为水和甲醇混合会放热，其体积也会增大，等到进样时，样品溶液回至室温，体积减小，就会造成检测结果偏高。b）如果前后室温变化的话，也会造成分析结果的误差。比如，对照溶液进样时，是正常上班时间，实验室开了空调，温度为20℃，而到样品溶液进样时，已经到下班时间了，实验室人员下班时将空调关闭，实验室温度已经降为10℃，这时样品溶液浓度肯定也会增大。c）由于对照品相对比较贵重，一般实验室都会保存一段时间。如果下次分析时没有回至室温，或此时室温与对照品溶液配制时的温度已经发生了明显的变化，都会造成分析结果的误差。我曾经在一公司工作，当时有人在冬天配制了一份对照溶液，实验室温度大概为4℃，过了好几个月到夏天了，室温都达到30℃，他们竟然还在用这个对照溶液，我就无力吐槽了。d）有些人配好样品后，喜欢用手去握着容量瓶，细心观察的就会发现一会之后液面就明显高于刻度。如果操作者没有注意这点，有的样品立即进样，有的排队过了一会再进样，就会造成误差。

以上所述的，稀释剂为纯有机溶剂或有机溶剂比例很高的情况下，误差更明显，而这些往往容易被忽视。

4.6 残留同3.3，如果所用定量器具有残留的话，就会造成误差。

精
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分
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三人行

第1楼2014/04/11

称量准确，稀释平行，温度恒定，积分合理。

2

武灵

第2楼2014/04/12

这些要点在做液相检测结果测量不确定时，都是必须考虑进去的。

0

zhoujin83

第3楼2014/04/12

是啊，我也曾经受过不确定度计算的培训，深有感触。以上所说的一些注意事项，有很多是以前我及我的一些同事不注意的，我想到的都列出来了。肯定也还有一些没想到的，大家一起讨论讨论。
武灵(zhonghuashendun) 发表:这些要点在做液相检测结果测量不确定时，都是必须考虑进去的。

0

武灵

第4楼2014/04/13

根据评定不确定时所考虑的分量，很多注意点都能考虑到的。
zhoujin83(zhoujin83) 发表:是啊，我也曾经受过不确定度计算的培训，深有感触。以上所说的一些注意事项，有很多是以前我及我的一些同事不注意的，我想到的都列出来了。肯定也还有一些没想到的，大家一起讨论讨论。

0

doczheng

第5楼2014/04/14

称量的确是做含量最重要的环节

0

zhls

第6楼2014/04/17

做液相分析测含量的，这些都是注意的重要环节

0

houjjun

第7楼2014/04/21

也可以叫定量测试吧

0

zhoujin83

第8楼2014/04/22

液相色谱含量测定当然也是定量测试的一部分，但其他一些比如滴定、内标法或者紫外外标法等，和液相外标法还是有一些不一样的。
houjjun(houjjun) 发表:也可以叫定量测试吧

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houjjun

第9楼2014/04/22

哦，原来这样
zhoujin83(zhoujin83) 发表:液相色谱含量测定当然也是定量测试的一部分，但其他一些比如滴定、内标法或者紫外外标法等，和液相外标法还是有一些不一样的。

0

wangtao0726

第10楼2014/04/29

影响含量检测结果的因素还真不少，不过具体到各自的应用领域还的自己去摸索。

0

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