最近看了预柱和保护柱的区别，仍有一下疑问，与诸君讨论

做个脾气好的人

2015/07/24

私聊

液相色谱（LC）

最近大概看了一下本站中关于“预柱”和“保护柱”的讨论，受益匪浅。
联系到个人操作经验，发现仍有一些细节的地方尚不清楚，
特开此帖，与君讨论，望不吝赐教。
（1）保护柱结构问题
对于下面在这张图片，基本确定其是保护柱无疑。
那么柱中间灰白色的物质是烧结的筛板吗？填料被封在两个筛板中间吗？
柱体不连续的部分是有什么讲究吗？

（2）保护柱效果问题
保护柱一般使用与分析柱相同填料，可以保留溶解在流动相中的强保留物质，进而保护分析柱，
那么，问题来啦，
（2.1）假设某次色谱分离，使用流动相为50%甲醇-水，在此洗脱能力下，某些强保留物质即被吸附在保护柱上，且无法被流动相洗脱；
当分析结束后，一般使用洗脱能力更强的纯甲醇冲洗，那么保护柱中的强保留物质自然被冲到分析柱了，理论上也会被甲醇从分析柱中冲出，是这样吗？
（2.2）假设没有保护柱，溶解在流动相中的强保留物质被吸附在分析柱上，是不是会占用“作用位点”，进而影响样品的分离效果，引起柱效降低？
（3）保护柱的清洗问题
保护柱有筛板，可以过滤一些不溶的颗粒，那么可以反冲吗？
若反冲的话，是仅仅把柱倒着接到流路中，还是打开保护柱，把柱芯倒过来装进去？
保护柱有填料，可以取下来超声吗？
（4）保护柱的使用寿命
有网友说：保护柱是一次性的，无法再生。
个人认为：影响柱寿命的无非是填料吸附的强保留物质，假设RPLC常用的强洗脱溶剂：甲醇和乙腈，无法将保护柱冲洗干净，
可否使用异丙醇等溶剂进行再生？
进而疑问，保护柱在避免颗粒的同时，是不是为了避免那些无法被甲醇乙腈洗脱的物质污染分析柱而存在的？

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有水有渝

第1楼2015/07/24

应助达人

做个脾气好的人(v2827029) 发表:最近大概看了一下本站中关于“预柱”和“保护柱”的讨论，受益匪浅。
联系到个人操作经验，发现仍有一些细节的地方尚不清楚，
特开此帖，与君讨论，望不吝赐教。
（1）保护柱结构问题
对于下面在这张图片，基本确定其是保护柱无疑。
那么柱中间灰白色的物质是烧结的筛板吗？填料被封在两个筛板中间吗？
答：是筛板，填料是被封在两个筛板中间。
柱体不连续的部分是有什么讲究吗？
答：不连续的部分不变形、密封性好就行。有的是一体的无法拆开，有的是分体的可以拆开看到里面的填料情况。

（2）保护柱效果问题
保护柱一般使用与分析柱相同填料，可以保留溶解在流动相中的强保留物质，进而保护分析柱，
答：有的可能是能够较好的溶解在溶剂里，但并不一定能溶解在流动相中。

那么，问题来啦，
（2.1）假设某次色谱分离，使用流动相为50%甲醇-水，在此洗脱能力下，某些强保留物质即被吸附在保护柱上，且无法被流动相洗脱；
当分析结束后，一般使用洗脱能力更强的纯甲醇冲洗，那么保护柱中的强保留物质自然被冲到分析柱了，理论上也会被甲醇从分析柱中冲出，是这样吗？
答：是，但如果只能从保护柱上洗脱而无法从分析柱上冲出，理论上还是会污染分析柱。
（2.2）假设没有保护柱，溶解在流动相中的强保留物质被吸附在分析柱上，是不是会占用“作用位点”，进而影响样品的分离效果，引起柱效降低？
答：会，一般污染的地方都是色谱柱头，从大家拆开的色谱柱头可以看出填料明显变色，而污染范围一般都在1cm以内，所以一般保护柱填料长度也就在1cm，色谱柱头被污染后，会使峰形变差，甚至出现肩峰，开叉峰。

（3）保护柱的清洗问题
保护柱有筛板，可以过滤一些不溶的颗粒，那么可以反冲吗？
答：可以咨询生产商，问前后筛板的孔径和填料粒径是不是一样，反冲会不会使填料冲出，如果不会冲出，就可以反冲。
若反冲的话，是仅仅把柱倒着接到流路中，还是打开保护柱，把柱芯倒过来装进去？
答：反冲时，倒装保护柱就行，出口直接放空至废液瓶，不接色谱柱和后续设备。
保护柱有填料，可以取下来超声吗？
答：这个没有验证过，不过填料是硅胶基质的，要看其硬度和超声波的功率，如果超声会使硅胶颗粒破碎，不建议使用超声处理。

（4）保护柱的使用寿命
有网友说：保护柱是一次性的，无法再生。
个人认为：影响柱寿命的无非是填料吸附的强保留物质，假设RPLC常用的强洗脱溶剂：甲醇和乙腈，无法将保护柱冲洗干净，
可否使用异丙醇等溶剂进行再生？
进而疑问，保护柱在避免颗粒的同时，是不是为了避免那些无法被甲醇乙腈洗脱的物质污染分析柱而存在的？
答：反冲其实也是一种再生，分析柱都可以再生，保护柱当然也可以，不建议再生，往往是因为再生的效果相对于再生过程的麻烦程度与成本来说并具备明显的经济效益，所以一般都不会去再生，我曾经把达到使用寿命的保护柱中的填料掏空用做的填料回填，装不好的话密封性下降而无法使用，所以保护柱很难永久使用，总有一些是你使用异丙醇也无法洗脱的。保护柱同时具有截留颗粒与难洗脱物质的双重功效，从这一方面来说，最好的办法是在分析结束后保护柱与分析柱分开清洗，出口都放空，这样保护柱中被清洗下来的物质不会污染分析柱与检测器，但操作麻烦，很少人愿意做。