无菌检查操作规程.

无菌检查操作规程

1. 目的： 规范无菌检查操作
2. 范围：无菌检查操作
3. 责任： 无菌检验员
4.无菌检查依据GB/T14233.2—2005 成品无菌试验方法，中国药典2010年版附录无菌试验方法
准备:
1 无菌检查在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的隔离系统中进行。本公司无菌检查操作环境地点为生物检验室。



2. 设备
超净工作台 恒温培养箱 压力蒸汽灭菌锅 电热干燥箱
2.1 准备室


2.2培养室


3. 培养基
硫乙醇酸盐流体培养基 改良马丁（真菌）培养基
4. 培养基制备
4.1制备好的培养基4℃保存， 15天内用完。
4.2硫乙醇酸盐流体培养基装量应符合培养结束后氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。接种前培养基氧化层（粉红色）高度不超过培养基深度的1/5,否则，需经100℃水浴加热至粉红色消失(不超过20分钟)，迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
培养基氧化层（粉红色）高度超过培养基深度的1/5

100℃水浴加热后

5.无菌室检查
无菌室消毒后与试验过程中，应检查沉降菌数。平皿暴露空气中30分钟，营养琼脂平皿沉降菌数平均不超过3个，单只平皿细菌数不超过4个。
试验过程中，应在试验开始时，开盖暴露所处试验环境中，至试验结束，同法培养，应符合上述要求。
6.所有器具、试剂、培养基应置压力蒸汽灭菌器内121℃30分钟
7. 供试品检查
9.1 同一批号至少5个单位供试品
9.2 制备及接种应按无菌超作法进行。优先采用将供试品或其有代表性的各部分直接投入培养基内培养。
接种后的培养基

9.3.供试品包装应完好无损，尤其是只有一层包装的样品。进入无菌检验室的样品若有两层（或两层以上）包装的，需将外包装在传递窗（或缓冲间）拆除后，传入实验室。

操作人员准备：带口罩、帽子、穿专用无菌服、鞋进入无菌室。9.3.供试品包装应完好无损，尤其是只有一层包装的样品。进入无菌检验室的样品若有两层（或两层以上）包装的，需将外包装在传递窗（或缓冲间）拆除后，传入实验室。

操作人员准备：带口罩、帽子、穿专用无菌服、鞋进入无菌室。

9.3.供试品包装应完好无损，尤其是只有一层包装的样品。进入无菌检验室的样品若有两层（或两层以上）包装的，需将外包装在传递窗（或缓冲间）拆除后，传入实验室。

操作人员准备：带口罩、帽子、穿专用无菌服、鞋进入无菌室。

10.硫乙醇酸盐流体培养基每管装量≥15mL，

改良马丁培养基每管装量≥10mL。

接种后，硫乙醇酸盐流体培养基30～35℃（细菌）至少培养14天，

霉菌（真菌）培养基23～28℃至少培养14天。

9.3.供试品包装应完好无损，尤其是只有一层包装的样品。进入无菌检验室的样品若有两层（或两层以上）包装的，需将外包装在传递窗（或缓冲间）拆除后，传入实验室。

操作人员准备：带口罩、帽子、穿专用无菌服、鞋进入无菌室。

11.结果判定

阳性对照管混浊（24小时后）有细菌生长，阴性对照管与样品管均为澄清，样品合格。

样品管任何一管混浊并确定有菌，判定样品不合格。

除阳性管外，其余各管均不得有菌生长，否则判定样品不合格。

12.记录
无菌检验记录
生测检验培养基台帐
培养基验证检查记录表
微生物菌种制备、传代、使用记录
无菌检验室清洗、消毒记录