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关于菲罗门色谱柱的柱压升高的问题

  • 你一见我就笑2169
    2018/04/25
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 之前一根Water X-Bridge(150*4.6 5微米)的色谱柱,使用了两年时间,柱效下降,峰形分叉。年后换用了菲罗门的Gemini色谱柱(150*4.6 5微米)替代。结果发现柱压持续上升。这个柱子主要做两个产品,整理了一下这段时间第一个产品的柱压变化情况,如下图(D列为梯度的起始压力,E列是梯度结束时的压力):
    期间测试过两次系统压力,均正常。流动相也是按照纯水有效期3天,纯乙腈有效期15天,混合比例有效期7天执行,样品进样前也用0.45微米的滤头过滤了。
    该分析方法的条件如下:
    流动相A:0.1%NH3H2O水溶液; 流动相B:乙腈
    流速:1ml/min
    柱温:35度
    梯度: 0min: 5%B 20min: 95%B 30min:95%B
    其中,之前压力曲线比较平滑,但是3月28号的时候,初始比例的压力曲线波动变得较大,如下图:
    另外一个产品的压力变化情况,如下图:

    该产品的分析方法如下:
    流动相A:水:乙腈=50:50 流动相B:水:乙腈=20:80
    流速:1ml/min;
    柱温:25度;
    梯度:0~20min: 100%A 20~27min:100%A切换成100%B; 27~45min:100%B
    该产品的压力波动还较平稳(红色和粉色为压力曲线),只是压力较之前高了许多,但是峰形已经开始展宽,如下图:

    使用不到两个月时间,每次用完都会冲洗色谱柱。
    联系过菲罗门的技术人员,按照他们技术人员的建议:0.2ml/min纯乙腈,反冲过夜。结果:压力没什么变化。
    再次联系,告知没有更好的办法了……
    个人认为该注意的都注意到了,实在找不到原因。看看各位有没有遇到过这种情况,想找到原因所在,以便以后尽量避免。再者,就是各位有没有什么好的办法,解决这个柱压问题,谢谢!
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  • 夏天的雪

    第1楼2018/04/25

    应助达人

    这款柱子的耐碱性如何,会不会使用过程中碱性破坏了填料,一般柱子不太耐碱

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  • 支点

    第2楼2018/04/25

    应助达人

    仪器上有没有保护柱或者筛板之类的东西没有,不接柱子的压力如何。
    用的A家的1290,流动相每次都是0.22的滤膜过滤,遇到过压力一直升高的问题,排查后发现是泵后一个过滤筛板的问题,然后卸掉这个筛板就好了。

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  • 你一见我就笑2169

    第3楼2018/04/25

    这跟柱子PH使用范围是1~12,和Water X-Bridge系列是一样的。
    另外,查看了去年10月份到12月份,使用Water X-Bridge色谱柱做上述产品I-CBMT时的压力曲线,从10月份开始做到年前柱效变差期间,压力无明显升高。

    夏天的雪(bingwang228) 发表:这款柱子的耐碱性如何,会不会使用过程中碱性破坏了填料,一般柱子不太耐碱

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  • 你一见我就笑2169

    第4楼2018/04/25

    一直以来都没有使用过保护柱。连接两通,测试过系统压力:纯水,1ml/min,压力在26Bar,属于正常范围。
    1290上限是3000bar,色谱柱也都是小粒度的,流动相要求高一些,属于正常吧。你指的筛板在哪个地方?这台1260之前没出现过这种情况。

    支点(zhx_fs_ln) 发表:仪器上有没有保护柱或者筛板之类的东西没有,不接柱子的压力如何。
    用的A家的1290,流动相每次都是0.22的滤膜过滤,遇到过压力一直升高的问题,排查后发现是泵后一个过滤筛板的问题,然后卸掉这个筛板就好了。

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  • 支点

    第5楼2018/04/25

    应助达人

    26bar也不算小了,1260的单向阀好像有个过滤白头,换换试试。

    你一见我就笑2169(v2650137) 发表: 一直以来都没有使用过保护柱。连接两通,测试过系统压力:纯水,1ml/min,压力在26Bar,属于正常范围。
    1290上限是3000bar,色谱柱也都是小粒度的,流动相要求高一些,属于正常吧。你指的筛板在哪个地方?这台1260之前没出现过这种情况。

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  • 夏天的雪

    第6楼2018/04/25

    应助达人

    第一个压力图毛刺比较多,考虑是否有小气泡或者单向阀有问题。如果接两通压力正常,考虑还是柱子的问题。柱子筛板比较容易堵,建议有些排查

    你一见我就笑2169(v2650137) 发表: 这跟柱子PH使用范围是1~12,和Water X-Bridge系列是一样的。
    另外,查看了去年10月份到12月份,使用Water X-Bridge色谱柱做上述产品I-CBMT时的压力曲线,从10月份开始做到年前柱效变差期间,压力无明显升高。

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  • Insm_94ac62b2

    第7楼2018/04/25

    我最近用的也是Gemini 的柱子,也遇到柱压升高的情况。很困惑,请问,亲 找到原因了吗?

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  • m3123499

    第8楼2018/04/26

    可以将柱子卸开,将筛板超声清洗,安装好后试一下

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  • 你一见我就笑2169

    第9楼2018/05/02

    最初怀疑的就是筛板堵塞,咨询过菲罗门技术人员,回复是:这跟柱子可以反冲,建议乙腈做流动相,0.2ml/min流速反冲过夜。尝试过之后依旧没有改善,冲洗前后没有什么区别。从朋友那里了解到,他们公司使用菲罗门色谱柱做过三次样品,第四次就出现了峰形分叉,自此开始怀疑色谱柱的质量问题。
    04.26,换了Agilent SB-C18的色谱柱,做某个产品,发现此现象依旧存在,具体数据见下图:
    疑惑1:柱压升高无非就是堵塞,而堵塞源头无非就是流动相和样品。进一步加大流动相的更换频率且样品都进行了过滤,问题依旧存在;
    疑惑2:Agilent客服怀疑流动相来源,但是另一台仪器(使用频率更高,多为中控较杂较脏的样品)无此现象,流动相是同一来源;
    疑惑3:菲罗门技术人员怀疑是筛板堵塞,但是反冲之后,一点效果都没有;
    疑惑4:若原因来自流动相,现象应该是持续性的存在。但实际情况是:某一次序列比较平稳,某一次又一针比一针高(同一批流动相也有此现象);
    大家有什么高见?

    夏天的雪(bingwang228) 发表: 第一个压力图毛刺比较多,考虑是否有小气泡或者单向阀有问题。如果接两通压力正常,考虑还是柱子的问题。柱子筛板比较容易堵,建议有些排查

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  • 夏天的雪

    第10楼2018/05/02

    应助达人

    更换色谱柱后压力同样不断增加,在考虑色谱柱的原因之外,还需考虑仪器的因素,建议接两通进行排查。引起压力升高的原因是多方面的,流动相中的滤头、在线过滤器、色谱柱、样品造成的堵塞、缓冲盐的析出、检测器堵塞等等。

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