菊粉的测定

一、高效液相色谱法（HPLC）
原理：
利用高效液相色谱仪，将样品中的菊粉分离出来，并通过特定的检测器进行检测。通常使用的检测器有示差折光检测器（RID）或蒸发光散射检测器（ELSD）。
样品经过提取、净化等前处理步骤后，注入色谱系统。菊粉在色谱柱上根据其分子大小、极性等特性与其他成分分离，然后被检测器检测到。
步骤：
样品前处理：
将食品样品粉碎均匀，称取一定量的样品于容器中。
加入适当的提取溶剂，如热水或乙醇溶液，进行提取。提取过程可以通过加热、搅拌或超声辅助等方式加速菊粉的溶解和提取。
提取液经过过滤、离心等操作，去除固体杂质，得到澄清的提取液。
如果需要进一步净化，可以采用固相萃取（SPE）等方法，去除样品中的干扰物质。
色谱分析：
选择合适的色谱柱，如碳水化合物分析柱或凝胶渗透色谱柱。
设置色谱条件，包括流动相组成、流速、柱温等。一般来说，流动相可以选择水或乙腈 - 水等混合溶剂。
将处理后的样品注入色谱仪，进行分离和检测。根据菊粉的保留时间和峰面积等信息，确定样品中菊粉的含量。
二、酶解法结合比色测定
原理：
利用特定的酶将菊粉分解为单糖，然后通过比色法测定单糖的含量，从而间接确定菊粉的含量。
菊粉可以被菊粉酶分解为果糖和葡萄糖等单糖。通过测定反应后生成的单糖的量，可以计算出菊粉的含量。
步骤：
样品前处理：
与 HPLC 法类似，将食品样品粉碎均匀，称取一定量的样品。
加入提取溶剂提取菊粉，提取液经过过滤、离心等处理得到澄清的提取液。
酶解反应：
将提取液与菊粉酶溶液混合，在适当的温度和 pH 条件下进行酶解反应。反应时间根据酶的活性和样品中菊粉的含量而定。
比色测定：
反应结束后，采用比色法测定生成的单糖的含量。常用的方法有 DNS 法（3,5 - 二硝基水杨酸法）或蒽酮法等。
根据标准曲线或已知浓度的单糖溶液，计算出样品中生成的单糖的量，进而确定菊粉的含量。
三、近红外光谱法（NIRS）
原理：
近红外光谱法是一种快速、无损的检测方法。利用近红外光谱仪对食品样品进行扫描，获得样品的近红外光谱。通过建立菊粉含量与光谱数据之间的数学模型，可以快速预测样品中菊粉的含量。
步骤：
样品制备：
将食品样品制备成适合近红外光谱分析的状态，如粉末、颗粒或液体等。
光谱采集：
使用近红外光谱仪对样品进行扫描，获得样品的近红外光谱。在采集光谱时，需要注意仪器的参数设置、样品的放置方式等因素，以确保获得准确的光谱数据。
模型建立与预测：
选择一定数量的已知菊粉含量的样品，采集其近红外光谱，并建立菊粉含量与光谱数据之间的数学模型。常用的建模方法有偏最小二乘法（PLS）、主成分回归法（PCR）等。
将未知样品的光谱数据代入建立的模型中，即可预测样品中菊粉的含量。