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C18 色谱柱可能被蛋白质污染了,常规冲柱方法都没用该咋办

  • Insp_1fdeac62
    2020/04/03
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 前段时间在做代谢实验,由于普通的甲醇乙腈变性蛋白质使我的目标化合物无法检测到,于是参考文献尝试少量甲酸变性,结果最近柱压升的厉害,虽然本来也很高了。色谱柱为ACE excel3 C18-AR,目前初始95:5水乙腈,0.6流速柱压240bar+。这个条件是更换了预柱柱心,液相脱气阀的一个柱芯后的柱压。
    尝试了几种冲洗方法:
    1、高水相低流速正冲;
    2、纯甲醇低流速正冲;
    3、咨询技术支持后90:10乙腈水,低流速逐渐升高反冲;
    4、(技术支持)85:15异丙醇水低流速反冲。
    目前看效果都不明显。
    试了这么多办法,很多不得不用的办法都用上了还是没效果,目前还是觉得最有可能的污染物是蛋白质,可能是由于前处理过程蛋白质变性不彻底,流动相中的乙腈使蛋白质变性析出,不过不能确定污染物是否只在筛板还是已经进到柱头里了。前处理过程有两步离心也过了滤膜。现在非常绝望,求助一下各位大神,还有什么除了换柱子的其他路子再拯救一下,谢谢大家了
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  • 检测老菜鸟

    第1楼2020/04/03

    应助达人

    500μL1%SDS溶液用1ml/min的流速,然后用从5%~95%含1%三氟乙酸的乙晴梯度洗脱。

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  • 检测老菜鸟

    第2楼2020/04/03

    应助达人

    单独有机溶剂无法清除的,缓冲盐、离子对试剂反而很好。

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  • Insm_c20149d

    第3楼2020/04/03

    应助达人

    最后可以拆柱子,看看柱前筛板是不是有污染的,一定不要抠填料,超生清洗一下,再试试!如果是里面填料污染了,那就没有办法了!

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  • myoldid

    第4楼2020/04/03

    应助达人

    实在不行就拆柱子清洗筛板吧,调料可以挖掉一坨,然后用同样型号的的废柱子出口段的调料填充,这样填充后,还能测几百针样

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  • dadgoh

    第5楼2020/04/03

    应助达人

    一般恢复的办法。

    myoldid(v2963297)发表:实在不行就拆柱子清洗筛板吧,调料可以挖掉一坨,然后用同样型号的的废柱子出口段的调料填充,这样填充后,还能测几百针样

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  • QC

    第6楼2020/04/05

    应助达人

    建议用扳手卸掉色谱柱前端,把筛板清洗干净。一般筛板脏了,可以看出来,柱头有部分白色结晶。用另外一个色谱柱试试,有没有可能是系统其它部位堵了,特别是检测器流通池可能堵了,也可以不换色谱柱采取不连接检测器试试看看柱压。

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  • 一片枫叶

    第7楼2020/04/30

    应助达人

    楼主问题解决了没?
    根据回帖找出最佳答案,以便于尽快结贴!

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