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选择因子的改变对分离度的影响

液相色谱(LC)

  • 影响分离度的因素





    N:柱效,正比于长度,反比于粒径

    a选择因子

    k保留因子

    R:分离度

    由上式公式可知选择因子对分离度影响最大

    案例

    结构式

    需分离以上两个位置异构体并且分离相邻杂质

    原方法参数

    需解决问题:两物质分离不完全,并且有杂质干扰

    思考:如何进行优化

    柱效N柱效较高 L/D=150/2.7=55.6,上升空间小.

    选择因子Bonus RP填料色谱柱三氟乙酸水溶液及乙腈的流动相体系

    保留因子k:两物质出峰在19min左右改变梯度对其分离影响较小

    所以只有改变选择因子才能实现分离。

    实验设计

    MPA流动相

    色谱柱

    结果

    0.05%TFA

    X-Bridge C18 4.6*150mm 5μm

    两主峰未达到基线分离

    0.05%TFA

    X-Bridge phenyl 4.6*150mm 3.5μm

    两主峰未达到基线分离

    高氯酸盐

    X-Bridge C18 4.6*150mm 5μm

    主峰分离情况较好。

    优化后参数:

    Column

    Xbridge C18 4.6*150mm,5μm

    Wavelength

    250nm

    Column Temperature

    30

    Flow

    1.0mL/min

    Acquisition Time

    30min

    Injection Volumn

    2μL

    MP A

    40mM高氯酸铵(4.68g高氯酸铵至1000m水),用磷酸调节pH2.4

    MP B

    ACN

    Gradient

    Time (min)

    MP A(%)

    MP B(%)

    0

    60

    40

    15

    20

    80

    30

    20

    80

    柱效N柱效比原方法低 L/D=150/5=30.

    选择因子XBridge C18填料色谱柱高氯酸磷酸及乙腈的流动相体系

    保留因子k:两物质出峰在13-15min

    两物质及与其相邻杂质已完全分离

    图谱如下





    总结高氯酸根有打乱氢键作用力的能力,对具有-NH2-NHR,-OH-X基团的化合物有意想不到的分离效果


    更多精彩内容可以关注公众号:研发分析之路


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