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第1楼2024/09/25
电泳结果中连 marker 都没有跑出来可能有以下原因:
一、电泳缓冲液问题
缓冲液配制错误:
如果缓冲液的浓度配制不准确,可能会影响电泳的效果。例如,浓度过高可能导致电流过大,发热严重,影响样品的迁移;浓度过低则可能使电流过小,样品迁移速度过慢或无法迁移。检查缓冲液的配方,确保按照正确的比例进行配制。
缓冲液的 pH 值也很关键。不合适的 pH 值可能影响样品的带电性质,从而影响电泳效果。使用 pH 计检查缓冲液的 pH 值,确保在合适的范围内。
缓冲液污染或失效:
缓冲液如果被污染,可能含有杂质或微生物,影响电流的传导和样品的迁移。检查缓冲液是否澄清,有无异味或沉淀。如果有污染迹象,应重新配制缓冲液。
长时间使用的缓冲液可能会失效。缓冲液中的成分可能会随着时间的推移而分解或挥发,影响电泳效果。定期更换缓冲液,确保其有效性。
二、样品问题
样品制备错误:
样品中可能含有杂质或沉淀,影响样品的迁移。在制备样品时,确保样品充分溶解,没有颗粒或沉淀。可以通过离心、过滤等方法去除杂质。
样品的浓度过高或过低也可能影响电泳结果。浓度过高可能导致样品堆积在加样孔中,无法迁移;浓度过低则可能使信号太弱,难以观察到。根据实验要求,调整样品的浓度。
样品的缓冲液体系与电泳缓冲液不兼容也可能导致问题。确保样品的缓冲液与电泳缓冲液在离子强度、pH 值等方面相匹配。
样品加载问题:
加样量过多可能会导致样品溢出加样孔,影响电泳效果;加样量过少则可能使信号太弱,难以观察到。按照实验要求,控制好加样量。
加样时可能没有将样品完全加入加样孔中,或者样品在加样孔中分布不均匀。确保样品准确地加入加样孔中,并尽量使样品在孔中分布均匀。
三、凝胶问题
凝胶配制错误:
凝胶的浓度配制不准确可能会影响样品的迁移速度。浓度过高可能使样品迁移速度过慢;浓度过低则可能使样品迁移速度过快,分辨率降低。检查凝胶的配方,确保按照正确的比例进行配制。
凝胶的凝固时间可能会影响其质量。如果凝胶没有完全凝固就进行电泳,可能会导致样品扩散或凝胶破裂。确保凝胶在合适的温度和时间下充分凝固。
凝胶老化或损坏:
长时间使用的凝胶可能会老化,影响电泳效果。检查凝胶的外观,如有裂缝、变形或变色等迹象,可能需要更换凝胶。
凝胶在制备、储存或使用过程中可能会受到损坏。例如,凝胶可能会被划破、污染或受到物理冲击。确保凝胶在处理和使用过程中小心谨慎,避免损坏。
四、电泳条件问题
电压和电流设置不当:
电压过高可能会导致过热,使样品变性或凝胶破裂;电压过低则可能使样品迁移速度过慢。根据实验要求和凝胶的规格,设置合适的电压。
电流过大也可能导致过热和样品变性。检查电泳仪的电流设置,确保在安全范围内。
电泳时间不足或过长:
电泳时间不足可能使样品没有充分迁移,无法观察到结果;电泳时间过长则可能使样品跑出凝胶,或者导致分辨率降低。根据实验要求和样品的迁移速度,确定合适的电泳时间。
五、仪器问题
电泳仪故障:
电泳仪可能存在故障,如电极接触不良、电源不稳定等。检查电泳仪的连接和电源,确保仪器正常工作。
电极可能被污染或损坏,影响电流的传导。检查电极的状态,如有必要,清洁或更换电极。
检测系统问题:
如果使用染色或荧光检测方法,检测系统可能存在问题。例如,染色剂可能失效、荧光染料的激发和发射波长设置不正确等。检查检测系统的设置和试剂,确保其正常工作。
检测设备可能存在故障,如成像系统故障、扫描仪故障等。检查检测设备的连接和设置,确保其正常工作。