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食用农产品快速检测结果验证评价报告-兽残瘦肉精

我是风儿

2021/08/01
农检联合队

私聊

兽药/抗生素检测

食用农产品快速检测结果验证评价报告

根据《省市场监督管理局办公室关于加强食品快速检测产品评价工作的通知》（市监办[2020]87号），于2020年10月对市辖区的各县市已投入使用的快检产品按照总局《食品快速检测方法评价技术规范》和省局《食品快速检测产品评价工作参考指南》的要求开展评价工作，现报告如下：

一、评价对象

兽药残留瘦肉精快速检测方法

二、评价依据

1、食品快速检测方法评价技术规范(食药监办科〔2017〕43号)

2、总局关于规范食品快速检测方法使用管理的意见(食药监科〔2017〕49号)

3、总局发布的食品快速检测方法（动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201706）

4、GB/T 22286-2008 动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法

三、评价项目

瘦肉精：克伦特罗

四、评价指标

包括灵敏度、特异性、假阴性率、假阳性率和与参比方法的一致性等。

五、评价方法

1、样品空白基质的选择

1.1 兽药残留克伦特罗快检空白基质

1.1.1 检测原理：本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中克伦特罗与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中克伦特罗进行定性判定。

1.1.2 基质确定: 选用该类产品适用的典型样品基质精瘦猪肉作为兽药残留克伦特罗快检的空白基质

1.2 样品基质

具体选取样品基质如下：

项目	样品基质
克伦特罗	精瘦猪肉

2、盲样制备

按照《省市场监督管理局办公室关于加强食品快速检测产品评价工作的通知》（市监办[2020]87号），验证样品分为农残残留、兽药残留2类，每类样品分为阴性样品、阳性样品2种，将每种样品随机产生3份，各县市区局将收到6份样品。

2.1 样品情况

2.1.2 兽药残留克伦特罗快检样品情况

阴性样品制备：市售猪瘦肉绞成肉糜，经GB/T 22286-2008 《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》液质法验证，确认不含克伦特罗。

阳性样品制备：取上述适量肉糜，添加克伦特罗标准品，搅拌混匀，制成加标水平为快检方法（KJ201706）检测限5倍水平的克伦特罗阳性样品。

阳性和阴性样品分装成20 g/份，随机派发10个县市，每个单位3份，其中阳性和阴性样品各15份。

2.2 样品均一性验证

2.2.2 兽药残留克伦特罗

取阴性和阳性留样样品经实验室采用GB/T 22286-2008 《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》验证。阴性样品（333）做2个平行，均未检出克伦特罗，阳性样品（444）做6个平行，均检出克伦特罗，检测结果分别为2.29、2.41、2.24、1.93、2.23、2.52μg/kg，平均值为2.27 μg/kg，SD为0.20，说明制备的样品均一性良好。

六、测定结果

2、兽药残留克伦特罗

2.1 各县市快测仪器及试剂盒汇总见表3。

表3 各县市克伦特罗快测仪器及试剂盒汇总

编号	县市	试剂盒			仪器
编号	县市	厂家	试剂盒名称	检出限	厂家	型号
1	**	深圳市易瑞生物科技有限公司	组织中莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗三合一快速检测试纸条Easy PrepTM	0.5μg/kg	合肥中科领谱科技有限公司	LP0453
2	**	14、深圳市易瑞生物科技有限公司 20、21厦门海荭兴科技股份有限公司	14、组织中莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗三合一快速检测试纸条Easy PrepTM 20、21克伦特罗食品安全快速检测试剂盒	0.5μg/kg	/	/
3	**	深圳市易瑞生物科技有限公司	组织中莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗三合一快速检测试纸条Easy PrepTM	0.5μg/kg	深圳市易瑞生物科技有限公司	易瑞生物一体化便携式食品药品安全快速检测系统化 YR-600Plus
4	**	深圳市易瑞生物科技有限公司	组织中莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗三合一快速检测试纸条Easy PrepTM	0.5μg/kg	/	/
5	**	深圳市易瑞生物科技有限公司	组织中莱克多巴胺、沙丁胺醇、克伦特罗三合一快速检测试纸条Easy PrepTM	0.5μg/kg	/	/
6	**	福州佳宸生物科技有限公司	盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测试剂板（对比法）	0.5μg/kg（ppb）	福州佳宸生物科技有限公司	多功能食品安全仪Polaris-PR70
7	**	厦门斯坦道科学仪器有限公司	盐酸克伦特罗快速检测卡（胶体金免疫层析法）	/	厦门斯坦道科学仪器有限公司	多功能食品安全检测仪STD-9000
8	**	厦门斯坦道科学仪器有限公司	盐酸克伦特罗快速检测卡（胶体金免疫层析法）	/	厦门斯坦道科学仪器有限公司	多功能食品安全检测仪STD-9000
9	**	厦门市藤蔓生物科技有限公司	盐酸克伦特罗快速检测卡	3ng/mL	杭州天迈生物科技有限公司	TMYQ-112T
10	**	深圳市易瑞生物科技有限公司	盐酸克伦特罗快速检测卡（组织）	3ppb	合肥中科领谱科技有限公司	LP0453

注：**采用深圳易瑞产品检测14号样品，采用厦门海荭兴产品检测20和21号样品。

2.2 兽药残留克伦特罗各县市快检检测结果与实际结果比较

各县市兽药残留克伦特罗快检检测结果与实际结果比较见表4。

表4 克伦特罗快检结果

编号	县市	实际样品			快检结果
编号	县市	A	B	C	A	B	C
1	**	10+	17-	5-	10+	17-	5-
2	**	14+	20-	21+	14-	20-	21-
3	**	28+	19-	4-	28-	19-	4-
4	**	23+	27-	8+	23+	27-	8+
5	**	26+	16-	2-	26+	16-	2-
6	**	9+	18-	11+	9+	18-	11+
7	**	15+	24-	7-	15-	24-	7-
8	**	30+	12-	25+	30-	12+	25-
9	**	22+	3-	6-	22-	3-	6-
10	**	29+	1-	13+	29+	1-	13+

注：+：阳性样品，-：阴性样品；红色粗体：快检结果和实际样品不一致。

七、结果评价

1、各县市快检结果评价分析

按照总局食品快速检测方法评价技术规范(食药监办科〔2017〕43号)的要求，对方法的灵敏度、特异性、假阴性率、假阴性率进行评价，结果应符合总局公布的快检方法中的性能指标要求，快检方法与参比方法的经卡方检验，阳性确证比率在95%的置信区间内没有显著性差异。

1.2 兽药残留克伦特罗

15份阴性样品，有1份被检出克伦特罗。15份阳性样品，有8份检出克伦特罗，7份未检出克伦特罗，对快检方法的灵敏度、特异性、假阴性率、假阴性率、与参比方法的一致性进行评价，其评价方法参照“食品快速检测方法评价技术规范附件1“快速检测方法性能计算表”进行统计分析处理。结果见表6。

表6 克伦特罗快速检测方法性能评价

样品情况	检测结果		总计
	阳性	阴性
阳性	8	7	15
阴性	1	14	15
总数	9	21	30
显著性差异（2）	25/8=3.125
灵敏度（p+，%）	p+=8/15≈53.3%
特异性（p-，%）	p-=14/15=93.3%
假阴性率（pf-，%）	pf-=7/15=46.7%
假阳性率（pf+，%）	pf+=1/15=6.7%
相对准确度，%c	22/30≈73.3%

注：2＜3.84表示待确认方法与参比方法的阳性确证比率在95%的置信区间内没有显著性差异。2＞3.84表示两种方法的阳性确认比率在95%的置信区间内有显著性差异。

八、原因分析

兽药残留克伦特罗

通过对10个县市克伦特罗快检情况进行评价，使用加标盲样进行测试，考察了测试结果的灵敏度、特异性、假阳性率和假阴性率等综合性能。考察结果发现，本次快检测试的中的灵敏度指标、假阴性率指标性能达不到《动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测胶体金免疫层析法》（KJ201706）的要求，即灵敏度≥95%（本次评价结果为53.3%）、特异性≥85%（本次评价结果为93.3%）、假阴性率（漏检）≤5%（本次评价结果为46.7%）、假阳性率（误判）≤15%（本次评价结果为6.7%），经卡方检验，与参比方法的阳性确证比率在95%置信区间内无显著性差异。

各县市快检试剂盒比较：有6个县市采用深圳易瑞的两款产品，它们的检出限分别为0.5 μg/kg和3μg/kg（3ppb），快检的灵敏度为80%（8/10），特异性为100%（13/13)；有2个县市采用厦门斯坦道的同款产品，未标注检出限，它们的灵敏度为0%（0/3），特异性为66.7%（2/3)；有1个县市采用厦门海荭兴的产品，灵敏度为0%（0/1），特异性为100%（1/1)；1个县市采用厦门藤蔓的产品，灵敏度为0%（0/1），特异性为100%（2/2)。

其可能和不同厂家的试剂盒质量参差不齐，产品存在技术缺陷，准确率低有关，而且厂家均未在快检产品中配套质控样品或规定质控实验步骤。另外，检测人员是否有经过培训，操作是否熟练，也是一个重要影响因素。

附件1

快速检测方法性能指标计算表

样品情况a	检测结果b		总数
	阳性	阴性
阳性	N11	N12	N1.=N11+N12
阴性	N21	N22	N2.=N21+N22
总数	N.1=N11+N21	N.2=N12+N22	N=N1.+N2.或N.1+N.2
显著性差异（2）	2=（N12-N21-1）2/（N12+N21），自由度（df）=1
灵敏度（p+，%）	p+=N11/N1.
特异性（p-，%）	p-=N22/N2.
假阴性率（pf-，%）	pf-=N12/N1.=100-灵敏度
假阳性率（pf+，%）	pf+=N21/N2.=100-特异性
相对准确度，%c	（N11+N22）/(N1.+N2.)
注： a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果； b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。 N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。 C为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。