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磷脂色谱样品制备
小小矮马
2023/09/01
小矮马
私聊
液相色谱(LC)
磷脂色谱
样品制备
DPPC
、
L
yso
PC
、
D
OPC
、
D
SPC
和
D
MPC
采用三氯甲烷
-
甲醇(
1:1
,
v/v
)进行配制,其余磷脂类标准品采用
三氯甲烷
-
甲醇(
3
:1
,
v/v
)
进行配制。各类磷脂标准品溶液浓度控制在
0
.5-1.0
mg
/
m
L
,所有样品均用
0
.45
μ
m
有机滤膜过滤,
-
20
°C
冷藏备用
。
磷虾油磷脂和大豆卵磷脂提取:将磷虾油磷脂胶囊或大豆卵磷脂胶囊分别剪开,称取胶囊内容物各
1
00
mg
,用
2
0
m
L
正己烷
-
异丙醇(
1:1
,
v/v
)溶解稀释,样品超声
5 min
,用
0
.45
μ
m
有机滤膜过滤,常温下放置备用。
人血清磷脂提取采用
M
TBE-M
e
OH
体系,在
2
00
μ
L
人血清中加入
4
00
μ
L
MTBE
和
8
0
μ
L
M
e
OH
,涡旋
3
0
s
,以
3
000
rpm
离心
1
5
min
,此时两相分离,界面出现白色沉淀,取上层有机相,用氮气将溶液吹干,用
1
m
L
二氯甲烷
-
甲醇(
1
:1
,
v
/v
)复溶,用
0
.45
μ
m
有机滤膜过滤后冷藏备用。
乳腺癌细胞(河北大学附属医院提供)磷脂提取采用氯仿
-
甲醇体系,向细胞沉淀中加入
2 m
L
氯仿
-
甲醇
-
水(
2:
1:1
,
v/v/v
),
4
°C
8
000
rpm
离心
1
0
min
,吸取下层有机相,向剩余溶液中加入
5
0
μ
L
甲酸和
l m
L
上述混合溶液,
4
°C
8
000
rpm
离心
1
0
min
,吸取下层有机相,将两次下层有机相混合,用氮气吹干,加入
2 m
L
氯仿
-
甲醇
-
水(
2:
1:1
,
v/v/v
)
2 m
L
复溶,用
0
.45
μ
m
有机滤膜过滤后冷藏备用
附件:
15磷脂色谱样品制备.docx
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