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Chirascan 圆二色光谱仪简明操作步骤

杭老师

2023/11/03

其他色谱仪综合讨论

开通氮气和仪器
1.1打开氮气压力阀，检查氮气钢瓶及氮气压力表是否正常，设定氮气的输出压力为约0.4Mpa。
1.2开启仪器的电源：按Lamp开关（左侧黑色按钮），此时氙灯未被点亮；
按System开关（右侧黑色按钮），仪器自检后Status指示灯渐渐变为稳定的绿色（说明：Rx Tx
为红色指示灯，当操作软件运行后会正常闪烁）
1.3开启电脑，点击电脑桌面的ANMSNitrogen软件图标，弹出吹扫氮气软件。如果显示未连接，则
选择左上角处的COM3连接。可以点击start lamp ignite sequence（氮气+自动点灯）或者N2 on only
（仅氮气），目的是先吹扫氮气。注意：通氮气至少约20分钟后，才能点亮氙灯光源，长时间（1个月
以上）未启用仪器，需使仪器通氮气的1小时以上。然后可以点击lamp immediate start，点亮氙灯。

开启操作软件
2.1双击Chirascan图标，主界面弹出。单击主界面上方快捷栏中的Pro Data（放大镜）图标（不要点击
电脑桌面上的Pro Data，这时为离线状态，仅可用于查看已有文档，但不能用于扫描测试中）
2.2设定当前工作目录或新建文件夹：
单击Pro Data界面工具栏中的图标新新建文件夹，并将其设为当前工作目录（点击）；
说明：文件夹和数据文件必须用英文或数字命名，不能用点和句号等特殊标点，否则无法打开数据

设置测量参数
3.1设定带宽Bandwidth，开机默认设置为1.0nm。当测量波长大于500nm时，需适当增加带宽，比如
1.5nm或2nm等，单击set确认
3.2选择光谱的测量范围（蛋白样品如180-260nm）及步进（0.5nm，1nm等），单击set确认
3.3.设置单个数据点的采样时间，默认Time-per-point为0.5s
说明：设置时间越长，数据信噪比越好，曲线越平滑，但是整个扫描时间会增加，从右侧显示的预估扫描测量时间可看出。0.1s是最小值
3.4 如需要使用控温，则在启动软件之前先开启循环水浴和电子控温器，点击操作界面右上方温度setting
后可以输入设置温度（0-100oC）

实验测量步骤
4.1测量仪器背景，记录吸收零值（因此后面我们所说的紫外吸收值都是相对于空气背景的吸收）样品
仓空置，直接采集空气（氮气）的值，点击Background
4.2测量样品体系背景
单击主界面快捷栏图标，弹出命名界面中，对应Spectrum下命名文件（如Buffer）
选择合适的比色皿，装入Buffer或溶剂，单击Acquire后仪器自动开始扫描并采集数据
说明：放入比色皿时要记住比色皿朝向和样品槽中位置，在一个系列的实验中必须保持用同一个比色皿，同样朝向和同样放入位置；0.5mm和1mm比色皿要用垫片牢固，两片式的比色皿要用夹具
点击图谱上方Window选项，出现下拉菜单，new windows里点击absorbance，可以显示吸收图谱！！

4.3测量样品
命名界面在Spectrum下命名文件，如Sample 1。
使用上步中同一个比色皿，装入要测量的样品，放入样品槽中（注意比色皿左右朝向），单击Acquire
4.4多次测量
通常建议对溶剂采集2次，对样品采集3次数据，可勾选主界面左下方的Repeat设置重复次数

数据处理
将所有要处理的数据都拖入同一数据界面，图谱上方点击绿色的D按钮可弹出处理界面
5.1多次重复数据的求平均Average
首先平均溶剂数据，Buffer的2次测量数据，全部选中后点Average，得到Average:0文件；再平均样品数据，Sample的3次测量图谱，全部选中点Average，得到Average:1文件
5.2扣除体系背景（即Subtract Baseline）
选中溶剂文件，如上步平均后的溶剂数据Average:0，点击Set Baseline；再选中样品数据，Average:1，点Subtract Baseline得到Subtracted:0文件
解除背景单击Unset Baseline，选中扣除溶剂后的样品文件Subtracted:0文件，点击Remove Others
5.3平滑处理Smooth
选中要平滑处理的文件，如Subtracted:0，点击Smooth，进入Smooth界面，左上角的Window选择平滑次数，如4：要满足数据曲线不失真，噪音水平在零值附近上下平衡，点OK，得到平滑后的文件Smooth(s):0（需保留）和平滑噪音信号Smooth(r):0（需去除）
5.4 点击左上方的保存图标，

数据文件保存
测量得到的原始数据文件会自动保存，但是处理后的数据需要再次保存。
点击左上方的保存图标或者点击File选择Save as保存为不同文件类型或格式的文件，便于以后的调用或引用

数据输出
测量数据可以输出为各种格式，如ASCII，CSV，TXT等。CSV的文档可用Excel软件打开。
如果图谱中只有一条曲线，那么另存为simple CSV；如果多条图线，必须另存为prodata CSV。

实验结束
实验结束后应严格清洗比色皿，依据样品性质用buffer，水，乙醇，甲醇以及稀酸（2M 硝酸）或浓硝酸清洗，最好用专门的复合表面活性剂在50-60度环境中浸泡清洗10-15min，如Hellma NEXIII或Decon 90 等，最后要用水洗掉这些活性剂
说明：检查比色皿是否干净，可装入水后测量180-260nm范围CD谱线，看看是否平整并接近零值

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