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【“仪”起享奥运】中药材蛤蚧PCR-试纸条快速分子鉴定方法
城头变幻大王骑
2024/08/07
私聊
中药/天然药检测
目的
建立中药材蛤蚧聚合酶链反应(
PCR
)-免疫胶体金试纸条快速分子鉴定方法,研发快速基因检测试剂盒。
方法
筛选提取基因组DNA的方法及试剂,根据蛤蚧mtDNA cytb基因设计种属特异性引物并标记,筛选最佳反应条件,研发
PCR
基因检测试剂,采用分子克隆及基因测序技术制备对照药材DNA克隆液,利用免疫胶体金试纸条进行结果检测。进而,开发出一体化快速基因检测试剂盒,并对特异性、重现性、灵敏性、稳定性进行评价。
结果
基因组DNA的完整性、浓度、纯度均满足
PCR
的要求,引物在退火温度63 ℃时,循环20次时,免疫胶体金试纸条显示:蛤蚧对照药材及正品出现两条红色条带,易混品及空白对照出现一条红的条带。琼脂糖凝胶电泳验证正确。对照药材克隆测序结果于蛤蚧mtDNA cytb基因同源性100%。一体化快速基因检测试剂盒的特异性强、重现性好、稳定性好、灵敏度高于琼脂糖凝胶电泳10倍。
结论
PCR
-免疫胶体金试纸条鉴定方法能够特异、准确、快速、可视化地鉴定蛤蚧的真伪,一体化快速检测试剂盒使鉴定方法更加规范化、标准化,更适合实地现场检测、适合普遍推广使用。
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私聊
xiahuanihao
第1楼
2024/08/08
深入了解中药材蛤蚧。
0
发表回复
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