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【“仪”起享奥运】冻存细胞复苏后出现白色絮状物不溶解的沉淀是为什么?

城头变幻大王骑

2024/08/10

食品常规理化分析

冻存细胞复苏后出现白色絮状物不溶解的沉淀，可能的原因有以下几种：
- 蛋白质沉淀： DMSO和血清混合后，在低温下容易导致蛋白质变性沉淀。这种沉淀通常是絮状或颗粒状，不溶于培养基。
- 磷酸钙沉淀： 血清中含有磷酸钙，在低温下也容易析出沉淀。这种沉淀通常是细小的颗粒状，不溶于培养基。
- 细胞碎片： 冻存过程中，部分细胞可能受到损伤破裂，形成细胞碎片。这些碎片可能与蛋白质沉淀一起形成絮状物。
是否能继续培养：
- 少量沉淀： 如果沉淀量很少，对细胞生长影响不大，可以继续培养观察。
- 大量沉淀： 如果沉淀量较多，可能会影响细胞贴壁和生长。建议先将细胞离心，去除上清液中的沉淀，再用新鲜培养基重悬细胞，铺板培养。
细胞滤器过滤：

使用细胞滤器过滤可以去除大部分沉淀，但并不能完全排除污染的可能性。

是否会演变为细胞污染：
- 无菌操作： 如果在复苏和过滤过程中严格执行无菌操作，一般不会引入污染。
- 观察细胞状态： 继续培养时，密切观察细胞形态和生长情况。如果出现异常，及时处理。
建议：
- 优化冻存液配方： 尝试降低DMSO浓度或加入海藻糖等保护剂，减少蛋白质沉淀。
- 缓慢复苏： 复苏时，将冻存管迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃使其尽快融化，然后立即加入预热的培养基稀释。
- 及时处理沉淀： 复苏后，尽快将细胞转移到新的培养皿中，避免沉淀对细胞的影响。
如果您不确定沉淀的性质，建议咨询专业的细胞培养实验室或研究人员，进行进一步分析和处理。

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